免疫细胞检测技术:NK细胞活性测定:同位素法

  无菌取脾,置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中,用镊子轻轻将脾撕碎,制成单细胞悬液.经200目筛网过滤,用Hanks液洗3次,每次离心10min(1000r/min).然后将细胞悬浮于2mL的完全培养液中,用台酚兰染色计数活细胞数(应在95%以上),最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为1×107个/mL....

实验技能SOP:生物样品的采集及实验动物的解剖和脏器系数测定标准操作规程(SOP)

① 鼠尾采血:当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾,将尾部浸入45~50℃温水中数分钟,使尾静脉充血,擦干,再用酒精棉球擦试消毒。剪掉尾尖(约0.2~0.3cm),拭去第一滴血。然后用血色素吸管定量吸取尾血,或将尾血直接滴入容器内。采血完毕用干棉球止血。亦可不剪尾,用7~8号注射针头连上注射器直接刺破尾静脉采血。...

饲养:灵长类实验动物饲养管理的操作规程一

  因此,国内外都在大力发展灵长类动物的人工养殖.在我国,实验猴养殖发展迅速,短短几年从原有的五个机构增到十几个至几十个机构,养殖数量数十万只,每年繁殖仔猴2万余只.中国经数十年的,几代人的努力,积累了大量经验,建立起一整套质量管理措施.猕猴的群体生产工作是一项系统的工程,饲养、护理、消毒、防疫、配种繁育、档案记录等每一环节的技术工作都关系到这项工程的成败....

细胞培养:传代细胞培养与观察

  细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外长期生长,必须满足两个基本要求:一是供给细胞存活所必需的条件,如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度,注意外酸碱度和渗透压的调节。二是严格控制无菌条件。...

细胞培养:G418筛选慢病毒感染稳定细胞株

  每种细胞对抗生素的性不同,因此,准备建立稳定细胞系之前,需要确定能够在10-14天细胞的最佳浓度....

PCR技术:PCR用于进化分析

那些把注意力集中在同功酶的分析及细胞核和细胞器DNAs图谱分析上的种群 生物不需要具有更高分辩率的方法。直到如今,要获得比几个典型生物更多的序列数 据都是不现实的。在筛选克隆文库、制作克隆子的图谱及测序上所需的努力过大,以 至对特定进行更多的个体检测是不可能的。聚合酶链瓜在克服了用于进化研究的 传统DNA分析法的局限性。...

PCR技术:PCR产物克隆的四种方法

通常情况下,PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接,但其连接效率效低.因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性,能在两6条 DNA链的3末端加上一个多余的碱基,使合成的PCR产物成为3突出一个碱基的DNA.这种DNA的连接效率很低.由于PCR产物的效率通过较高,.在采用大量T4DNA连接酶并配以5-10u T4 RNA连接酶时,可显著提高其连接效率.对于较短PCR产物,用PUS19的HincⅡ位点进行克隆,以X-gal和IPTG筛选,常可得到足量重组子.另一种提高克隆效率的途径是先用Klen...

蛋白分离纯化:蛋白质纯化之离子交换法

3.待胶体沉降完全后,高度应在15 cm 左右.胶柱以buffer A-0 一直流洗,流速快慢可以不考虑;连接好收集器,每试管收2.5 mL.离子交换法的胶体平衡极为重要,可测流出液的pH 或离子浓度,看是否与buffer A-0 相同,若不一样则需要再流洗的....

蛋白分离纯化:蛋白质纯化经验指南(4)

  3)在做WB,因为是血清标本,含有较多的白蛋白,可能影响我的实验结果.我请问过ptglab楼主,他推荐我来这儿问一问.请问高手有什么方法吗?哪一种比较简单经济?蓝色琼脂糖凝胶可以分离吗?...

Cell:科学家开发出基于CRISPR的新技术 或有望开发更为安全的基因编辑疗法

  如今科学家们能够利用基因魔剪—CRISPR来对几乎任何有机体的遗传代码进行编辑,基于CRISPR的基因编辑技术对人类健康有着巨大的影响,目前已经有一系列利用CRISPR技术对人类细胞进行的试验正在进行之中,但这种方法似乎并不完美;从理论上来讲,基因编辑的工作原理就类似于利用一种自动纠正功能俩修复文档中重复出现的错误,但寻找并且编辑基因的CRISPR蛋白有时候却会靶向作用错误的基因,这样其就会将拼写正确的单次修正为拼写错误的单词,然而对错误的基因进行编辑还会产生新的问题,比如促进健康细胞发生...

基因编辑技术的最新进展

  2016年初,CRISPR/Cas9技术被英国人类繁育和胚胎学管理局批准,运用到人类胚胎上。承接这个备受争议的项目的正是弗朗西斯·克里克研究所。研究人员打算对人类胚胎进行基因编辑,并让其发育到第七天,以研究胚胎发育早期所必须的基因,以及流产的产生原因。但是经过基因编辑的胚胎不会继续发育下去,因此研究的最后,我们并不会得到一个所谓的“设计”出来的婴儿。...

免疫荧光:免疫荧光双标技术中操作要点和注意事项

一定浓度的MW6 000~8 000的聚乙二醇(PEG),能沉淀免疫复合物,但不能沉淀正常球蛋白,沉淀的免疫复合物可用放射免疫法或用分光光度计测定其含量。...

免疫检测分析:聚乙二醇(PEG)沉淀法检测循环免疫复合物

一定浓度的MW6 000~8 000的聚乙二醇(PEG),能沉淀免疫复合物,但不能沉淀正常球蛋白,沉淀的免疫复合物可用放射免疫法或用分光光度计测定其含量。...

饲养:大蚕期饲养管理

(2) 丝腺生长显著加快.在第五龄,丝腺迅速生长,数天之内,重量增加40倍左右,特别是五龄第四天以后,丝腺生长更为显著.这时要给与充足的桑叶,使蚕饱食.如果此时食桑不足或叶质过老,丝腺就不能充分生长,影响蚕茧产量和质量....

实验动物基本操作:右室内压的测定

  4.用于家兔或者大鼠、比较柔软的塑料导管(家兔用导管外径为2mm,内径为1.5mm;大鼠用导管外径为1mm,内径为0.8mm),经过特殊的加工处理,使导管的管头部分有一定的弯度(图)。...