生物医学技术_生物岛网

细胞培养：动物细胞培养及外源基因导入的原理和操作

2018-04-23 12 0

　　然而，细胞培养也有其局限性。由于培养的细胞脱离了机体复杂的条件，其细胞形态和功能都会发生一定程度的改变。尤其是体外反复传代、长期培养的细胞，有可能发生染色体非二倍体改变等情况。因此，应将体外培养的细胞视为一种既保持动物体内原细胞一定的性状又具有某些改变的特定的细胞群体。...

细胞培养：细胞生物基本方法：常规组织培养法

2018-04-23 12 0

　　3、处理组织：把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟....

1、引物长度一般为15-30个核苷酸,在做长片段PCR或做某些特殊的PCR时应使用较长的引物,但最多不超过50个核苷酸.2、碱基分布的均衡性同一碱基连续出现不应超过5个；GC含量一般40-60%;GC含量太低导致引物Tm值较低,使用较低的退火温度不利于提高PCR的性;GC含量太高也易于引发非扩增.3、引物Tm值一般要求：55℃-65℃.计算：对于低于20个碱基的引物,Tm值可根据Tm=4(G C) 2(A T)来粗略估算；对于较长引物,Tm值则需要考虑热动力学参数,从“最近邻位”的计算方式得到,这也是现有...

PRC技术：PCR的引物设计注意要点

2018-04-23 28 0

1、引物长度一般为15-30个核苷酸,在做长片段PCR或做某些特殊的PCR时应使用较长的引物,但最多不超过50个核苷酸.2、碱基分布的均衡性同一碱基连续出现不应超过5个；GC含量一般40-60%;GC含量太低导致引物Tm值较低,使用较低的退火温度不利于提高PCR的性;GC含量太高也易于引发非扩增.3、引物Tm值一般要求：55℃-65℃.计算：对于低于20个碱基的引物,Tm值可根据Tm=4(G C) 2(A T)来粗略估算；对于较长引物,Tm值则需要考虑热动力学参数,从“最近邻位”的计算方式得到,这也是现有...

蛋白提取：选择材料及预处理

2018-04-23 12 0

　　微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料,所选用的材料主要依据实验目的来确定.对于微生物,应注意它的生长期,在微生物的对数生长期,酶和核酸的含量较高,可以获得高产量,以微生物为材料时有两种情况：(1)得用微生物菌体分泌到培养基中的代谢产物和胞外酶等;(2)利用菌体含有的生化物质,如蛋白质、核酸和胞内酶等.植物材料必须经过去壳,脱脂并注意植物品种和生长发育状况不同,其中所含生物大的量变化很大,另外与季节性关系密切.对动物组织,必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料,先进行绞碎、脱脂等处理.另外,...

Western-blot：蛋白免疫印迹技术

2018-04-23 10 0

　　实验对象为组织样品,取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml含蛋白酶剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂),匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白)....

肺病新药Bevespi Aerosphere3期试验结果积极，明年申请中国上市

2018-04-23 23 0

16、测量上清的体积,将其连同 0.6 倍体积的异丙醇一起移入一只洁净离心管中并将其充分混匀,室温下放置 10min .17、在室温下以 12000g(Sorvall GSA 转头, 10000r/min) 离心 15min ,回收沉淀下来的核酸.若在 4 ℃下离心也会使盐也沉淀下来18、小心弃去上清,将离心管敞开盖,倒置于纸巾上以除去的上清.在室温下用 70% 的乙醇刷洗管底及管壁,倒掉乙醇,并用与真空管道相连的巴斯德吸管除去附于管壁的液滴.将离心管开口倒置于纸巾上使剩余的乙醇挥发掉.此时沉淀应该仍然是...

质粒提取：煮沸裂解法大量制备质粒DNA

2018-04-23 10 0

16、测量上清的体积,将其连同 0.6 倍体积的异丙醇一起移入一只洁净离心管中并将其充分混匀,室温下放置 10min .17、在室温下以 12000g(Sorvall GSA 转头, 10000r/min) 离心 15min ,回收沉淀下来的核酸.若在 4 ℃下离心也会使盐也沉淀下来18、小心弃去上清,将离心管敞开盖,倒置于纸巾上以除去的上清.在室温下用 70% 的乙醇刷洗管底及管壁,倒掉乙醇,并用与真空管道相连的巴斯德吸管除去附于管壁的液滴.将离心管开口倒置于纸巾上使剩余的乙醇挥发掉.此时沉淀应该仍然是...