引物设计黄金

引物长度(primer length)常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。...

蛋白表达:原核表达操作流程

  提高外源基因表达水平的基本手段之一,就是将宿主菌的生长与外源基因的表达分成两个阶段,以减轻宿主菌的负荷。常用的有温度和药物。本实验采用异丙基硫代-β-D-半乳糖昔(IPTG)外源基因表达。...

蛋白表达:Survivin蛋白在喉癌中的表达及临床意义

Survivin是近年来发现的一种新的凋亡蛋白,在肺癌、结肠癌、前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、淋巴瘤等肿瘤组织中选择性表达,而在正常成熟组织中为阴性 [1] .喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)是头颈部常见的恶性肿瘤,为了解喉鳞癌组织中Survivin的表达,本文采用免疫组织化学SP法对喉鳞癌组织中Survivin蛋白的表达进行了研究,报告如下....

最新!魔剪CRISPR“脱靶效应”有了“克星”

在介绍新前,先带大家回顾一下去年UCSF的研究人员获得这一重要发现。在这一发表于Cell上题为“Inhibition of CRISPR-Cas9 with Bacteriophage Proteins”的论文中,科学家们找到了在细菌和人类细胞中能都能够CRISPR系统基因编辑活性的anti-CRISPR剂。具体来说,研究发现了两个CRISPR“关闭开关”:AcrIIA2和AcrIIA4。它们通过阻碍Cas9酶的活性发挥作用。...

免疫检测分析:放射免疫测定操作的安全措施

  工作人员被放射性同位素污染是生物医学实验中最大的危害之一,为了在操作过程中确保安全,有许多严格的和要求.虽然在通常实验中所用同位素的量相对地讲是低的,但这些预防措施必须严格遵守.现对从事这一工作的一些原则作一简述,多半是一些普通的常识,但在执行时往往容易忽略而造成严重的后果....

免疫检测分析:放射免疫分析试剂

  标记抗原应具备:①比放射性高,以方法的灵敏度;②免疫活性好;③所用的核素的半衰期尽可能长,标记一次可较长时间使用,这对来之不易的抗原尤其重要;④标记简便、易防护....

实验动物基础:实验用小鼠概述

  主要的优点为:基因特性明确、提供大多数的近亲品系,同源异基因品系(congenic),及重组近亲品系、体型小,允许大数量的使用、可以无菌和无病原性的生产,以及可以有高生殖率的性能....

实验动物模型:大鼠贝美格癫痫模型

(1)行为学观察 参照Racine 分级标准 (见大鼠青霉素癫痫模型).结果显示,注药后出现1~2级癫痫行为,潜伏期为1~15min,平均(6.25±4.95)min.对照组注射生理盐水2ml无癫痫发作....

细胞培养:细胞培养中一定要用血清吗?

在无血清培养基出现之前,血清被广泛用于细胞培养达几十年之久。动物血清主要包括胎牛血清、小牛血清、成牛血清、马血清、羊血清、鸡血清、兔血清等,其中以胎牛血清的使用最为普遍。 动物血清在细胞培养中提供细胞增殖所需的生长因子、激素、转移蛋白、贴壁和铺展在培养基质上的因子、蛋白酶剂和其他营养物质。使用血清的优点是血清含有促进细胞增殖和维持的大部分因子,它几乎是通用的生长添加物,适用于动物、人和昆虫细胞等的细胞培养。因而使用血清不需要为每一个细胞系优化培养基,节省了大量时间和精力。...

细胞培养:细胞生物活性的化学检测法

●0.25%胰蛋白酶消化细胞使其成为单细胞,用含0.1%胎牛血清的RPMI培养基配成1 x10^9个/L的但细胞悬液,将细胞接种于96孔培养板中,每孔100ul....

免疫PCR [Immuno PCR, Im-]

  用抗体检测抗原是免疫学的最基本方法,用酶或同位素标记抗体可使检测的性提高,常用的定量检测方法ELISA和RIA均基于标记可以使检测的信号增强。免疫PCR是在ELISA的基础上建立起来的新方法,用PCR扩增代替ELISA的酶催化底物显色。PCR具有很强的放大能力,其可以定量地检测DNA和RNA,具有非常高的性和性,因此,将与抗原结合的抗体通过连接与DNA结合,再经PCR扩增,由此定量检测抗原使性高于ELISA和RIA。...

推荐:PCR实验技术指南

所谓“工欲善其事,必先利其器”,这年头手工设计引物的人似乎不多,还是用软件方便些,防止你一不小心看走眼,丢一个碱基,同时计算起来也方便。设计软件有很多,既可以在线),也可以用Primer5、Oligo6.65 等等。...

蛋白质含量测定:人血清、血浆及相关液体样本中血清淀粉样蛋白A(SAA)含量的测定

1. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融;...

蛋白分离纯化:重组蛋白纯化的基本策略

  分辨率:由选择的方法和层析介质生成窄峰的能力来实现.总的来说,当杂质和目标蛋白性质相似时,在纯化的最后阶段分辨率是重要因素.  1、通过组和各种方法使纯化步骤之间...

Cancer Dis:科学家发现新靶点 有助开发癌症治疗新药

  —最近,来自美国大学的研究人员发现靶向一种对肿瘤生长非常关键的酶能够帮助对抗癌症,该研究将有助于开发黑色素瘤、胰腺癌和结直肠癌生长的新药物。相关研究结果在...