免疫荧光：彩色免疫金银法（CIGSS）实验步骤
结果:CIGSS的优点:①阳性结果比黑色更鲜明;②可以使弱信号得到放大;③消除IGSS背景染色;④信号/背景比值高;⑤是开展免疫金银双标技术的新途径.光镜下见HBsAg阳性物质呈鲜艳的蓝色(α-萘酚为成色剂)或呈绿色(菲尼酮为成色剂).背景干净,阳性结果清楚....
免疫细胞检测技术：流式细胞术在高等植物研究中的应用
流式细胞术(Flow cytometry,简称FCM)是20世纪70年代发展起来的一种对细胞的物质及化学性质,如细胞大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等进行快速测定并可分类收集的技术.该技术超越了传统显微分析技术,能在瞬间对大量细胞进行准确的分析.这种快速有效的细胞分析技术已广泛应用于细胞生物学、免疫学、发育生物学、细胞动力学、生理学、生物学等生物学研究的各个领域,在其基础上建立的流式细胞仪系统,具有体积小、功能全和使用方便等特点.本文简要介绍FCM 的原理,对其在高等植物研究中的应用作了综述....
饲养：提高仔兔成活率的关键措施
仔兔出生后6～10小时内一定要吃到初乳,遇到不愿喂奶的母兔,应人工强制喂奶.做法是：将母兔固定在产箱或专门的哺乳箱内,由饲养员一手抓住母兔颈部,另一手抚摸母兔背部,使其保持安静,并将仔兔放到母兔乳头旁,让仔兔吸吮母兔乳头.连续几次后,母兔便会自动哺乳.每次喂奶后,应检查仔兔是否吃饱,吃足奶的仔兔腹部滚圆,肤色红润、光亮,安睡不动.吃奶不足的仔兔瘦小,皮肤皱缩,腹瘪,在窝内不停地爬动,如用手摸,仔兔便会往上蹿,有的还会发出吱吱叫声.一般每天喂奶一次即可,若产崽少,则每天早、晚各喂一次.产崽多或母兔发生乳...
实验动物模型：海人酸侧脑室注射致大鼠慢性颞叶癫痫模型
(1)行为学观察 参照Racine分级标准(见大鼠青霉素癫痫模型).根据大鼠癫痫状表现分为3期：急性期(手术后1~2d)、潜伏期(急性期后10d~3个月)、慢性期(3个月以后).结果显示：①急性期 海仁酸注射几分钟后,大鼠出现动须.面部肌肉颤动,多数先为同侧,后发展为两侧,出现凝视、点头、咀嚼(能听到明显的磨牙声)、面部抽搐,留涎,向空中跃起、摔倒,持续3~5h.发作间期,面部仍保持颤动.后多次发作,出现肌肉痉挛性前窜的动作.可间断发作2d.②潜伏期 癫痫症状完全消失,恢复正常,体质量回升,易激惹,抓持时...
Nature：利用CRISPRCas9OCT4基因在人胚胎早期发育中发挥着关键作用
这些研究人员利用CRISPR/Cas9一种关键的基因表达蛋白OCT4。在正常情形下，该基因在人胚胎的最初几天发育中是有活性的。在卵子受精后，它一直进行，大约7天后，它形成一种有大约200个细胞组成的，即囊胚（blastocyst）。这项研究发现人胚胎需要OCT4来正确地形成囊胚。...
细胞培养：细胞培养的基本概念和名词
细胞系(cell line)：原代培养经首次传代成功后即成细胞系,由原先存在于原代培养物中的细胞世系锁组成....
PCR反应体系与反应条件及PCR原理（入门）
PCR的反应动力学 PCR的三个反应步骤反复进行，使DNA扩增量呈指数上升。反应最终的DNA 扩增量可用Y＝(1＋X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数，X表示平(Y)均每次的扩增效率，n代表循环次数。平均扩增效率的理论值为100%，但在实际反应中平均效率达不到理论值。反应初期，靶序列DNA片段的增加呈指数形式，随着PCR产物的逐渐积累，被扩增的DNA片段不再呈指数增加，而进入线性增长期或静止期，即出现“停滞效应”，这种效应称平台期数、PCR扩增效率及DNA聚合酶PCR的种类和活性及非性产物的竟争等因...
重组DNA导入原核细胞及PCR检测
是指将质粒DNA或构建的重组子导入细胞的过程。细菌细胞在低温，低渗（CaCl2溶液）中膨胀成球形。混合物中的DNA形成了抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面。经42℃短时间热激处理后，促进了细胞吸收DNA复合物。重组质粒宿主细胞后，还需要对菌落进行筛选鉴定，通过α互补进行筛选是最常用的鉴定方法之一。...
蛋白表达：Adeno-X 表达系统----最有效的腺病毒系统之一
腺病毒介导的基因转移可以在人细胞中最高水平地表达目的蛋白质 (1).因为含目的基因的重组腺病毒DNA是游离于细胞基因组外的 (不整合入宿主基因组),所以目的蛋白质得到瞬时的高水平表达.更重要的是利用腺病毒表达系统可以将外源基因转到及不的细胞中表达....
蛋白表达：原核表达条件优化
本实验中重组表达质粒PrP-pET-32a(+)不稳定的原因可能是PrP对E.coli BL21(DE3)具有细胞毒性.pET-32a(+)来源于pBR-322,pBR-322源于ColE1.ColE1、pBR-322 、pET- 32a(+)都失去了分配功能区par.而天然质粒具有功能区par,可以质粒在每次细胞周期中准确的进行分离,并均等的分配到子代细胞中去.功能区 par对质粒PrP-pET-32a(+)的稳定性是不可缺少的[4].缺少功能区par的pET-32a(+)质粒在每次细胞周期中随机分配到...
质粒提取：质粒的复制
无论是质粒,还是其复制子,均能通过合理分配提供影响质粒 DNA 合成起始效率的而维持其自身的复制与宿主增殖速率的协调.在携带 p MB1/colE 复制子的质粒中,这种正向调节式一种 RNA, 被称为 RNA Ⅱ,它被永固走引发 DNA 前导链的其实合成.但是,其他复制子(如 p SC101 )的调节则是一种顺式作用蛋白( RepA ) , 它对复制的起始具有正向作用,而对其自身基因的具有负调控作用.在任何情况下,正向调控的 RNA 和蛋白质的合成和活性都受到辅助性的反式作用产物的调节,后者的浓度随质粒拷...
质粒提取：在质粒载体中进行定向克隆
旋转柱层析装置 ，温度可调 16 ℃的水浴装置方法1、用两种适当的性内切核酸酶消化载体（ 10ug ）和外源 DNA 片段.为进行直接克隆,用两种性内切酶消化闭合环状的质粒载体,这样可以识别不同的序列以及产生不同的末端.无论哪段序列,我们应尽可能避免选用在多克隆位点上相距 12 个碱基以内的酶切位点,如果有一个酶切位点被切开,那么第二个酶切位点将离线状 DNA 的末端很近而影响第二个酶的酶切效率 .阅读生产厂家的说明以确定两种酶是否可在同样的缓冲液中工作.如果可以,就能用两种酶同时对质粒 DNA 进行消化...
免疫组化：单个噬菌体在石蜡包埋的组织上进行免疫组化
7.将大块的器官或肿瘤取出并切成小块,并把它们浸泡于4%PFA中.在PFA中固定的时间不能超过24小时....
免疫检测分析：胶体金实验技术相关问题总结
A:多抗不是很合适,有条件还是多用单抗.确实要用,多抗一般要过纯化柱纯化,以提高抗体的性....
实验动物基础：实验动物在放射生物学研究中的作用
超过一定剂量的高能辐射作用于机体,可引起体一系列性综合病症,称为放射病,或称为急性放射综合症(Acute Radiation Syndrome).这种病在平时极少见到,只有在核战争和核事帮情况下才可见到该病.因此研究这种疾病眩要是在实验室内选择各种实验动物来进行研究的.今天我们对辐射损伤的大部分知识,不是来自方广岛或长畸,也不是来自几个出过事故的反应堆,大量的知识是通过选用各种实验动物进行动物实验积累起来的.关于辐射的远期遗传效应至今只有动物实验的材料....