实验动物基础：突变系动物概述
连续选择携带目的突变基因同时有繁殖能力的兄妹进行交配,使其子代基因纯合,经过20代即可育成....
细胞培养：神经外胚层细胞培养
神经胶质细胞较易培养,它分为少突胶质细胞、星形胶质细胞和小胶质细胞三种.神经胶质细胞与神经元有共存关系,少突胶质细胞产生丰富的髓磷质,助于神经元兴奋传导,成熟的少突胶质细胞也无增值能力,星形胶质细胞有多种功能,调节神经元兴奋时产生的因子,可提供神经元营养,并能产生促神经元发展和完成功能活动的细胞因子,在朋友培养中有增值能力.以上说明,神经胶质细胞度神经元的存在和功能活动是十分重要的,也提示阐明神经胶质细胞的功能活动有利于神经元的培养....
细胞培养：大鼠胚胎神经嵴干细胞的直接分离和培养
经1000r/min离心5min后,弃去上清,沉淀细胞中加入细胞分散液,用吸管吹打分散,制成单细胞悬液....
PRC技术：PCR扩增的重要标准
性指的是在PCR扩增过程中,性地扩增目的片段而非其他片段的性 能.在PCR实验本身的灵敏度很高,且实验条件未充分优化的情况,通常会在目的片段出现的同时伴随有其他的杂带,即发生非性扩增的现象.模板、引物性质及质量、反应条件的控制等均会影响PCR扩增的性.近年来的研究结果表明,缓冲液的品质（如离子种类与组成,反应优化剂等）对PCR的性扩 增起着不可忽视的作用.一般的缓冲液中调节氢键作用的盐只有KCl,而东盛HSTM TaqMix的缓冲体系通过反应优化剂以及KCl/(NH4)SO4盐离子体系的平衡调节,显著提高...
蛋白表达：优化基因表达的关键因素之：基因的重新设计和合成
遗传密码有64种,但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分.那些被最频繁利用的称为最佳密码子(optimal codons),那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子(rare or low-usage codons).实际上用做蛋白表达或生产的每种生物(包括大肠杆菌,酵母,哺乳动物细胞,Pichia,植物细胞和昆虫细胞)都表现出某种程度的密码子利用的差异或偏爱.大肠杆菌、酵母、果蝇、灵长类等每种生物都有独特的8个密码子极少被利用[1].有趣的是,灵长类和酵母有6个同样的利用率低的密码子.大肠杆...
蛋白分离纯化：重组蛋白生产的问题
在传统的重组蛋白质分离纯化工艺中,大多采用经典的软凝胶分离介质,由于这种介质的颗粒较大,分离效率较差,因此常常需要采用多种不同模式的色谱操作联用对目标蛋白质进行纯化,才能得到纯度符合一定标准的目标蛋白质.另外,这种色谱介质的耐压性很差,只能在流速较低的情况下进行操作,分离纯化时间较长.分离纯化步骤多和分离时间长使得蛋白质的质量回收率和活性回收率很低.而且在传统的重组蛋白质生产工艺中,蛋白质的复性和纯化是生产过程中两个的单元操作,也在很大程度上制约着生产效率....
DNA提取与纯化：DNA片断的树脂回收技术
1. 对于>3Kb的片断在纯化回收时，洗脱前，如先将水或TE缓冲液预热到65-80℃，则将能有效的提高回收率。待洗脱片断>3Kb时，洗脱液温度应为65-80℃;待洗脱片断>20Kb时，洗脱液温度应达80℃。2. 应用TAE缓冲液，而不应用含TBE的胶，因硼酸能与琼脂糖中的方式糖单体或多聚体结合成难溶复合物，这种复合物使胶难熔解。3. 在取用纯化柱树脂中的液体前，应将树脂充分搅匀，如树脂中出现结晶或结块，则应将树脂在25-37℃，温热10分钟，冷却至30℃使用。树脂本身不会溶。4. 在紫外...
DNA提取与纯化：植物基因组DNA提取
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性.在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用....
免疫细胞检测手艺：GFP和PI标识表记标帜流式的问题
(1)正在一些SCI文献中报道,通过MTT法,此目标基因表达,推进一些细胞(非我用的细胞系,我用的转染CELL,之前没有报道!)增殖,可是,从周期图来看,转进去的阳性CELL,反而停正在G0/G1期了,取阳性CELL比拟,增殖的S+G2/M期CELL较着削减!...
抗体抗原尝试：抗体的I125标识表记标帜法
*留意:125I 对健康无害,需要办法.正在使用125I 应先相关同位素学问,及正在相关部分的监测下,按放射线同位素的使用及措置要求进行....
实验动物基础：猴生物学特性及解剖生理特点
2.进化程度高,接近于人类.因而,它们具有取人附近似的心理生化代谢特征和不异的药物代谢酶.大量尝试证明,灵长目动物正在药物代谢体例等上远较非灵长目动物更接近于人,正在灵长目动物中,从进化标准上越是接近于人,其代谢体例也越和人近似...
小鼠胚胎干细胞体外EB分化鉴定
③将培育皿放入37℃CO2培育箱培育，每天取出1-2次，悄悄晃悠或用粗口滴管吹打，使细胞悬浮，各团分隔，并每日察看;...
DNA的性内切酶酶切反应
2.DNA 纯度、缓冲液、温度前提及性内切酶本身城市影响性内切酶的活性。大部门性内切酶不受RNA 或单链DNA 的影响。当微量的污染物进入性内切酶储存液中时,会影响其进一步利用,因而正在吸收性内切酶时,每次都要用新的吸管头。若是采用两种性内切酶,必必要留意别离供给各自的最适盐浓度。若两者可用统一缓冲液,则可同时水解。若需要分歧的盐浓度,则低盐浓度的性内切酶必需起首利用,随后调理盐浓度,再用高盐浓度的性内切酶水解。也可正在第一个酶切反映完成后，用等体积酚/氯仿抽提，加0.1倍体积3mol/LNaAc 和2倍...
蛋白质含量测定：考马斯亮兰法（Bradford法）测定蛋白浓度
1976年由bradford建立的考马斯亮兰法(bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法....
Native-PAGE：Native-PAGE注意事项
2. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中,要注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性,所以最好在电泳槽外面放置冰块以降低温度;...