用十二烷基硫酸钠(SDS)和还原剂(琉基乙醇或二硫苏糖醇)热处理蛋白质样品,蛋白质中的二硫键被还原,解离的亚基与SDS 发生1 : 1.4 的定量结合.SDS 使蛋白质亚基带上大量负电荷,了蛋白质各种亚基间原有的电荷差异.亚基的构象均呈长椭圆棒状,各种蛋白质亚基-SDS 复合物表现出相等的电荷密度.在电场中其迁移速率仅与亚基质量有关,因此,SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳可以进行蛋白质亚基分离,并用来测量蛋白质亚基的质量....

　　(2)电泳后的凝胶用5～10倍体积固定液在室温下固定,酸性固定液扩散后可使凝胶中的溴酚蓝变黄.蓝色全部消失后,继续固定5min.为防止凝胶破裂,在进行步骤(2)之前可将凝胶浸泡于含20%甲醇、30%甘油的溶液中过夜....

同源模型化方法是蛋白质三维结构预测的主要方法.对蛋白质数据库PDB分析可以得到这样的结论：任何一对蛋白质,如果两者的序列等同部分超过30% (序列比对长度大于80),则它们具有相似的三维结构,即两个蛋白质的基本折叠相同,只是在非螺旋和非折叠区域的一些细节部分有所不同.蛋白质的结构比蛋白质的序列更保守,如果两个蛋白质的氨基酸残基序列有50%相同,那么约有90%的α碳原子的偏差不超过3%.这是同源模型化方法在结构预测方面成功的....

电泳条件 :100V恒压约20min,剂进入浓缩胶;改换160V恒压,当剂移动到胶板底部时,停止电泳,整个过程约80min....

　　本法操作简便迅速,且不消耗样品(可以回收),多用于纯化之蛋白质的微量测定.主要缺点：当待测的蛋白质与标准蛋白质中的酪氨酸和色氨酸含量差异较大时,则产生—定误差,混有核酸时必须分别测定280nm和260nm两处的OD值,再按公式推算蛋白质含量....

　　2.紫外吸收低,不发荧光.由于制备分离时,检测蛋白质的方法通常是测量280cm的吸光度,因此要求载体两性电解质在280cm的吸光度尽可能低....

目前,蛋白质序列数据库的数据积累的速度非常快,但是已知结构的蛋白质相对比较少.尽管蛋白质结构测定技术有了较为显著的进展,但是通过实验方法确定蛋白质结构的过程仍然非常复杂,代价较高,因此实验测定的蛋白质结构比已知的蛋白质序列要少得多.另一方面,随着 DNA 测序技术的发展,人类基因组及更多的模式生物基因组已被或将被完全测序,DNA序列数量将会急增,而由于DNA序列分析技术和基因识别方法的进步,我们可以从DNA推倒导出大量的蛋白质序列.这意味着已知序列的蛋白质数量和已测定结构的蛋白质数量(如蛋白质结构数据库P...

1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中,蛋白质的迁移率不仅和蛋白质的等电点有关,还和蛋白质的量以及形状有关,其中蛋白质的等电点是最重要...

　　双缩脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中可与铜离子产生紫红色的络合物,这一反应称为双缩脲反应.因为蛋白质中有多个肽键,也能与铜离子发生双缩脲反应,且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律,而与蛋白质的氨基酸组成及量无关,所以可用双缩脲法测定蛋白质的含量....

5、 立即插入适当的梳子,密切注意防止梳齿下产生气泡,用一有力的夹将梳子夹在一边的玻璃板上,然后将玻璃板斜靠在物体上,使成10°角,可减少液体泄漏的机会....

　　蛋白质特别是酶，可以加快化学反应的速度，所以被广泛用于药品和食品工业。蛋白质拥有复杂的空间结构，且其空间结构与蛋白质的功能直接相关，如果其空间结构被，则蛋白质失去活性。一个常见的例子是鸡蛋蛋清在加热后凝结成不透明状。在生产酶的过程中，约80%的制成酶由于蛋白质会变性而失去活性，所以工业生产中急需找到能恢复蛋白质活性的办法。2015年，美国化学家在实验室条件下成功恢复了受热变性的鸡蛋蛋白，但至今，科学家们未找到有效的工业条件下恢复变性蛋白的方法。...

通常第一维电泳是等电聚焦,在细管中(φ1～3 mm)中加入含有两性电解质、8M的脲以及非离子型去污剂的聚丙烯酰胺凝胶进行等电聚焦,变性的蛋白质根据其等电点的不同进行分离.而后将凝胶从管中取出,用含有SDS的缓冲液处理30 min,使SDS与蛋白质充分结合....

基于上述的策略,最邻近方法在预测二级结构方面包括两个过程,一是学习过程,二是预测过程.在学习阶段,用一个滑动窗口(例如长度为15)扫描已知结构的训练序列,序列个数为几百个,并且这些序列彼此之间的相似性很小.通过窗口扫描形成大量的短片段(称为训练片段),记录这些片段中心 氨基酸残基的二级结构.在预测阶段,利用同样大小的窗口扫描给定的序列U,将在每一个窗口下的序列片段U’与上述训练片段相比较,找出50个最相似的训练片段.假设这些相似片段中心残基各种二级结构的出现频率分别为fα、f&be...

a. 以上步骤,只可测定GUS 活性的相对大小,对色析法所得到的各个分划进行侦测,相当方便,但并非酶绝对活性单位的测定方法....

　　离子交换剂是在载体上键合了一些离子交换基团，而离子交换基团在水溶液中通过电离出游离的离子，这些离子可带正电或带负电，可以被溶液中的其它带相同电荷的离子取代，并对离子交换剂有较强的结合力。结合力的大小不仅受离子与离子交换剂之间作用力的影响，而且主要受离子浓度的影响，这个过程中的作用力是静电引力，离子交换的原理是静电相互作用。...