SDS-PAGE:考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液常见问题

溶液的pH值决定带电颗粒的解离程度.也决定物质所带净电荷的多少.对氨基酸、蛋白质等两性电解质而言,溶液PH值离等电点越远,颗粒所带净电荷越多,电泳速度越快.反之越慢.血清中:白蛋白pI 4.0;α2球蛋白 pI 5.06;β球蛋白 pI 5.1;γ球蛋白 pI 7.1.在pH 8.6的缓冲液中电泳时,都带负电荷,其泳动速度为:白蛋白>α2球蛋白>β球蛋白>γ球蛋白.为了利于分离蛋白质混合液,应选择一种使各种蛋白质所带电荷...

SDS-PAGE:SDS-PAGE的影响因素

溶液的pH值决定带电颗粒的解离程度.也决定物质所带净电荷的多少.对氨基酸、蛋白质等两性电解质而言,溶液PH值离等电点越远,颗粒所带净电荷越多,电泳速度越快.反之越慢.血清中:白蛋白pI 4.0;α2球蛋白 pI 5.06;β球蛋白 pI 5.1;γ球蛋白 pI 7.1.在pH 8.6的缓冲液中电泳时,都带负电荷,其泳动速度为:白蛋白>α2球蛋白>β球蛋白>γ球蛋白.为了利于分离蛋白质混合液,应选择一种使各种蛋白质所带电荷...

蛋白质修饰:蛋白质结构的预测软件

  蛋白质三维结构的预测方法通常包括:同源性建模和从头开始的预测方法.对数据库中已知结构的序列的比对是预测未知序列结构的主要方法,也即同源建模的方法....

蛋白质含量测定:HPLC测定乳糖酸红霉素的含量

乳糖酸红霉素是红霉素的乳糖醛酸盐,主要抗菌活性为乳糖酸红霉素A和含有一定活性的乳糖酸红霉素B、C .《中国药典2000年版采用微生物检定法进行含量测定 ,英国药典和欧洲药典均采用HPLC .鉴于微生物检定法影响因素较多,故采用高效液相色谱测定乳糖酸红霉素含量的方法....

SDS-PAGE:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法

2、将配制好的分离胶加入制胶槽中,注意应沿着边缘缓慢加入,千万别进气泡. 凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5CM或距梳子齿约0.5CM处....

蛋白质含量测定:蛋白质含量测定(考马斯亮蓝 G - 250 法)

考马斯亮蓝 G - 250 是一种染料,在游离状态下呈红色,当它与蛋自质结合后变为青色.蛋白质含量在 0 - 1000ug 范围内,蛋白质一色素结合物在 595 nm 下的吸光度与蛋自质含量成正比,故可用比色法测定....

蛋白质修饰:蛋白质二级结构预测的发展及局限性

  二级结构预测的第三代方法运用蛋白质序列的长程信息和蛋白质序列的进化信息,使二级结构预测的准确程度有了比较大的提高,特别是对β折叠的预测准确率有较大的提高,预测结果与实验观察趋于一致。一般75%的氨基酸残基可以被置换而不改变蛋白质的结构,然而有时改变几个关键的残基则可能导致蛋白质的结构。这好像是两个矛盾的结论,但解释又非常简单。一个蛋白质在其进化过程中探查了每个上氨基酸可能的与不可能的变化,不可能变化的部分是进化保守区域。可变部分的变化不改变结构,而不可变部分的变化则改变蛋白质的结构,由此失去...

指南单克隆抗体生产的细胞工程学

  哺乳动物细胞是用于生产单抗在内的商业化治疗性蛋白产品的主要宿主细胞。而中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)是目前大规模生产单抗最常用的宿主细胞。CHO细胞在抗体的实验室制备以及工业级的生产中起着越来越重要的作用。CHO细胞产品具有以下特点:人体应用安全、糖结构与天然的人单克隆抗体相似、易于转染、基因扩增系统强大、易于适应悬浮培养和无血清培养基、高密度生长的能力,因此非常合适用于大量单克隆抗体稳定生产。...

Native-PAGE:非变性胶蛋白电泳

  为了在测量数据处理、测量结果的表达,根据“测量不确定度评定和表示”JJF1059-1999的要求,我们对奶粉中蛋白含量测定结果的不确定度进行评定.应用测量不确定度评论,分析奶粉中蛋白质含量测定结果的不确定度评定....

蛋白质含量测定:奶粉中蛋白质含量测定结果的不确定度评定

  为了在测量数据处理、测量结果的表达,根据“测量不确定度评定和表示”JJF1059-1999的要求,我们对奶粉中蛋白含量测定结果的不确定度进行评定.应用测量不确定度评论,分析奶粉中蛋白质含量测定结果的不确定度评定....

蛋白质含量测定:6种方法测定蛋白质含量

  为了加速消化,可以加入CuSO4作催化剂,K2SO4以提高溶液的沸点.收集氨可用硼酸溶液,滴定则用强酸.实验和计算方法这里从略....

SDS-PAGE:低背景的蛋白质银染方法

  *说明,此步中洗涤过程要控制好,时间太长,可能显色时间太长甚至染不出色;反之,时间太短,银没有洗干净,背景变深.但做几次以后就很快掌握了....

2D电泳技术:凝胶电泳操作注意事项

  2.琼脂糖:不同厂家、不同批号的琼脂糖,其杂质含量不同,影响DNA的迁移及荧光背景的强度,应有选择地使用....

蛋白质修饰:蛋白质机构预测-线索化法

  对于一个未知结构的蛋白质(U),如果找到一个已知结构的远程同源蛋白质(T),那么可以根据T的结构模板通过远程同源模型化方法建立U的三维结构模型.一个成功的远程同源模型化方法要解决三个问题:(1)检测远程同源蛋白质(T);(2)U和T的序列必须被正确地比对或对比排列;(3)修改一般的同源模型化过程,以应用于相似度非常低的情况,即处理更多的环区,建立合理的三维结构模型....

蛋白质含量测定:蛋白测定方法之Folin—酚试剂法(Lowry法)

  folin―酚试剂法最早由lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤.以后在生物化学领域得到广泛的应用.这个测定法的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多,缺点是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且性较差,干扰物质较多.对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰lowry反应.而且对后者的影响还要大得多.酚类、柠檬酸、硫酸铵、tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用.浓度较低的尿素(0.5%),硫酸纳(1%),硝酸纳(1%),三氯乙酸(0.5%),乙醇(5%),(5%),丙...