SDS-PAGE：固相pH梯度等电聚焦简介
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蛋白质修饰：蛋白质二级结构预测－最邻近方法（NearestNeighboring
基于上述的策略,最邻近方法在预测二级结构方面包括两个过程,一是学习过程,二是预测过程.在学习阶段,用一个滑动窗口(例如长度为15)扫描已知结构的训练序列,序列个数为几百个,并且这些序列彼此之间的相似性很小.通过窗口扫描形成大量的短片段(称为训练片段),记录这些片段中心 氨基酸残基的二级结构.在预测阶段,利用同样大小的窗口扫描给定的序列U,将在每一个窗口下的序列片段U’与上述训练片段相比较,找出50个最相似的训练片段.假设这些相似片段中心残基各种二级结构的出现频率分别为fα、f&be...
眼泪可以预测糖尿病并发症
来自新南威尔士大学的研究人员测量了糖尿病患者眼泪样本中的P物质水平，通过这种非侵入性测试可以评估糖尿病神经病变的风险，研究人员指出，糖尿病患者的眼泪样本中P物质水平与早期角膜神经损害有着直接的关系，P物质水平异常可能导致角膜溃疡的发展，以及糖尿病患者伤口愈合困难。...
蛋白质含量测定：血清总蛋白质的测定方法
3、基于蛋白中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚试剂比色法由于各种蛋白质中上述两种氨基酸的组成比例不同,特别是白蛋白含色氨酸为0.2%,而γ-球蛋白中含量达2%-3%,导致较大的差异.Lowry的改良法在酚试剂中加入Cu2++,集中原法和双缩脲反应两者的作用,使呈色灵敏度提高.其中75%的呈色依赖于Cu2++.反应产物最佳吸收峰在650-750nm,方法灵敏度为双缩脲方法的100倍左右.有利于检测较微量的蛋白质.但试剂反应仍易受多种化合物的干扰....
2D电泳技术：双向电泳操作步骤及相关溶液配置
取0.001g BSA（牛血清白蛋白）用1ml超纯水溶解,测定BSA标准曲线ul 的BSA溶解液,另2管中分别加入2 ul的待测样品溶液,再在每管中加入相应体积的双蒸水（总体积为80ul）,然后,各管中分别加入4ml的Bradford液（原来配好的 Bradford液使用前需再取需要的剂量过滤一遍方能使用）,摇匀,2min在595nm下,按由低到高的浓度顺序测定各浓度BSA的OD值,再测样品 OD值.(测量过程要在一个小时内完成)....
SDS-PAGE：SDS-PAGE 蛋白质电泳常见问题
1. 剂前沿呈现两边向上或向下的现象.向上的"微笑"现象说明凝胶的不均匀冷却,中间部分冷却不好,所以导致凝胶中有不同的迁移率所致.这种情况在用 较厚的凝胶以及垂直电泳中时常发生.向下的"皱眉"现象常常是由于垂直电泳时电泳槽的装置不合适引起的,特别是当凝胶和玻璃板组成的"三明治"底部有气泡 或靠近隔片的凝胶聚合不完全便会产生这种现象....
SDS-PAGE：过氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳
由（2）式可以看出,凡能影响溶液粘度η的因素如温度,影响带电量q及解离度a的因素如pH的改变,都会对迁移率产生影响.因此,电泳应尽可能在恒温条件下进行.并选用一定pH的缓冲液.同时,所选用的pH以能扩大各种被分离物质所带电荷量的差异为好,以利于分离各种成分.迁移率与粒子的大小（r）有关,非球形粒子（如DNA）在电泳过程中会受到更大的阻力,即粒子的移动速度还与粒子形状有关...
蛋白质修饰：蛋白质二级结构预测－人工神经网络方法
用于蛋白质二级结构预测的基本神经网络模型为三层的前馈网络，包括输入层、隐含层以及输出层。每一层由若干神经元组成，输入层神经元与隐含层的神经元是完全连接的，即任何一个输入层神经元都与任何一个隐含层的神经元连接。同样，隐含层神经元与输出层的神经元也是完全连接的。如下图：...
Native-PAGE：Native-PAGE原理
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蛋白质含量测定：植物体内可溶性蛋白质含量的测定(福林－酚法的原理）
试管若干;刻度移液管0.5ml 1支,1ml 1支,10ml 1支;定量加样器;圆底烧瓶;冷凝管1套(带橡胶管);微量滴定管;小烧杯;微量进样器50μl 1支;721分光光度计;恒温水浴器;研钵;玻棒;离心机;离心机....
SDS-PAGE：SDS-PAGE电泳过程中常见问题以及解决方法
A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠),SDS会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合 SDS的量几乎总是与多肽的量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关,在达到饱和的状态下,每克多肽可与1.4g去污剂结合.当量在15KD到200KD之间时,蛋白质的迁移率和量的对数呈线性关系,符合下式：logMW=K-bX,式中：MW为量,X为迁移率,k、b均为,若将已知量的标准蛋白质的迁移率对量对数作图,可获得一条标准...
2D电泳技术：抑郁大鼠海马的双向凝胶电泳图谱分析
以雄性成年SD大鼠10只,采用慢性不可预见的轻度应激(chronicunp redictable mild stress,CUMS)制作抑郁症模型.将动物予以夹尾1 min、禁水24 h、禁食24 h、45℃5 min、昼夜24 h、水平振荡30 min (160次/min)、4℃冰水游泳5 min,7种刺激每天随机采取1种,共安排3周.经行为学测试：蔗糖水试验和旷野试验(open - field test)评估模型后,三氯乙酸/丙酮沉淀法提取海马组织蛋白质,以固相pH梯度双向凝胶电泳分离蛋白质,考马斯亮...
蛋白质修饰：蛋白质二级结构预测软件
目前较为常用的几种方法有：PHD、PSIPRED、Jpred、PREDATOR、PSA,其中最常用的是PHD.PHD结合了许多神经网络的,每个结果都是根据局部序列上下文关系和整体蛋白质性质(蛋白质长度、氨基酸频率等)来预测残基的二级结构.那么,最终的预测是这些神经网络每个输出的算术平均值.这种结合方案被称为陪审团决定法(jurydecision)或者称为所有胜利者(winner-take-all)法.PHD被认为是二级结构预测的标准.总的来说,二级结构预测仍是未能完全解决的问题,一般对于α...
Native-PAGE：Native-PAGE的分类
Blue Native PAGE是最古老的Native-PAGE技术.是以考马斯亮蓝作为电泳分离后蛋白质鉴定染料的一种电泳方法.这种方法的缺点是：考马斯亮蓝与蛋白的结合起到了去垢剂的作用,可能导致复合物的分离;并对化学发光或蛋白质辅基的荧光或荧光染料的标记具有潜在的猝灭作用....
蛋白质含量测定：种子蛋白质含量测定（凯氏定氮法）
根据蛋白质的含氮量比较恒定,平均约为16% ,通过测定样品的含氮量进而推算蛋白质的含量.种子中的氮化物可分为蛋白氮和非蛋白氮.用三氯乙酸溶出种子粉或脱脂种子粉中的非蛋白氮化物(氨基酸、酞胺 和无机氮),沉淀样品中的蛋白质并使二者分离.在催化剂参与下,用浓硫酸消煮分解样品,使蛋白氮为氨态氮,并与硫酸结合生成硫酸按.加碱蒸馏,使氨释 放出来并吸收于一定量的硼酸中,再用标准酸滴定,求出样品中氮含量,乘以16%的倒数6.25 即可换算成蛋白质含量....