基础知识：蛋白质二级结构（secondary structure）
α-螺旋(α-helix)是蛋白质中最常见最典型含量最丰富的二级结构元件.在α螺旋中,每 个螺旋周期包含 3.6 个氨基酸残基,残基侧链伸向外侧,同一肽链上的每个残基的酰胺氢原子和位于它后面的第4个残基上的羰基氧原子之间形成氢键.这种氢键大致与螺旋轴平行.一条多肽链呈α-螺旋构象的推动力就是所有肽键上的酰胺氢和羰基氧之间形成的链内氢键.在水中,肽键上的酰胺氢和羰基氧既能形成内部(α-螺旋内)的氢键,也能与水形成氢键.如果后者发生,多肽链呈现类似变...
Western-blot：Western Blot试剂的准备
16. Aprotinin:为一58氨基碱性多肽,经反复冻融后,会发生集聚,储存液应分装成小份,保存于-20度,每一小份用后应予废弃....
免疫荧光：免疫荧光染色技术Ⅱ
固定后以冷的0.01Mol/L pH7.4PBS液浸泡冲洗,最后以蒸馏水冲洗,防止自发性荧光....
抗体抗原实验：Fab片段抗体表达产物的纯化和鉴定
对于所获的Fab片段抗体，对某种性抗原的性鉴定，根据其所针对的抗原不同，则采用的方法也不同。主要方法有：...
实验技能SOP：注射用青霉素钠家兔热原实验法标准操作规程(SOP)
②检查供试品前3～7日应以下列试验用兔预测体温,进行挑选：新兔;上次试验升温达0.6℃休息两周以上的试验兔,三周未曾使用的试验兔.挑选试验的条件与检查供试品相同,仅不注射药液,测体温时,体温计插入的深度各兔应相等,约6cm,每1小时测理体温1次,,共测4次,体温均在 38.0～39.6℃范围内,且最高最低体温的差数不超过0.4℃为符合,方可供试验用.每只家兔用于热原试验体温的次数不超过10次;...
实验动物基础：Marlau笼养啮齿动物的标准化富集
摘要： 啮齿动物的富集与的新颖和复杂成分的刺激相结合，可影响大脑的可塑性，防止脑损伤的影响。我们设计Marlau™笼规范化大鼠和小鼠在富集过程中使用迷宫持续刺激大脑...
基础知识：用途多种多样的多肽药物
肿瘤的发生是多种原因作用的结果,但最终都要涉及及癌基因的表达调控.不同的肿瘤产生时所需要的酶等调控因子不同,选择性小肽作用于肿瘤发生时所需的调控因子等,封闭其活性位点,可防止肿瘤发生.现在已发现很多肿瘤相关基因及肿瘤产生调控因子,筛选与这些靶点结合的多肽,已成为寻找抗癌药物的新热点.美国学者发现了一个小肽(6个氨基酸),它在体内能显著腺癌的生长,包括肺、胃及在大肠腺癌为治疗这一死亡率很高的恶性肿瘤开辟了一条新.科学家发现另外一个小肽(8个氨基酸),它能进入肿瘤细胞,激活抗癌基因P53,肿瘤细胞的凋亡....
最近做原核表达的几点教训和体会，与大家分享
1. 首先介绍一下背景。载体是novagen公司的pET22b，Amp抗性。菌株是Invitrogen的BL21 star DE3，是一个蛋白降解酶突变菌株，也就是说是一种优化表达菌株。...
免疫荧光：免疫胶体金稀释液的配五原则
免疫胶体金毕竟是含有生物活性,应用时还要面对千差万别的样品,原则上需要稀释在合适pH的缓冲液中.经验值是6-9.在这个范围内可选的缓冲主要有tris和PB,也不排除其他种类缓冲适用的可能.当使用的缓冲离子强度过大如超过0.2M时,有可能造成、层析不好或检测结果异常.离子的种类也因为免疫胶体金的生物不同而有诸多,例如钙调蛋白可能与Ca离子有关系.而卤素离子强度对胶体金稳定性似乎有特殊的作用,教科书式的NaCl调试最适标记条件就是例子....
免疫检测分析：用比浊法测定大肠杆菌的生长曲线
比浊法是根据细菌悬液细胞数与混浊度成正比,与透光度成反比关系,利用光电比色计测定细胞悬液的光密度(即OD值),用于表示该菌在本实验条件下的相对生长量....
实验动物基础：实验动物和试验管理规程
3、本规程包括实验动物生产和动物试验两部分.实行国家有关实验动物的认证制度.各单位实验动物部门应根据本规程和具体条件,制定相应的实施细则执行....
实验动物基础：常用模式动物简介
目前在人口与健康领域应用最广的模式生物包括,噬菌体、大肠杆菌、酿酒酵母、秀丽隐杆线虫、海胆、果蝇、斑马鱼、爪蟾和小鼠.在植物学研究中比较常用的有,拟南芥、水稻等 常用模式动物简介。...
蛋白表达：甲醇酵母基因表达系统的研究进展
七十年代巴斯德毕赤酵母曾被用于生产单细胞蛋白(SCP),有很好的发酵基础,菌体密度可达100g/L干重.其生长培养液的组分包括无机盐、微量元素、生物素、氮源和碳源,廉价而无毒.它能在以甲醇为唯一碳源的培养基中快速生长,其中醇氧化酶AOX——甲醇代谢途径的关键酶可达细胞可溶性蛋白的30%[1].而在葡萄糖、甘油或乙醇作为碳源的培养细胞中则检测不到AOX.AOX的合成是在水平调控的.其基因启动子具有明显的调控功能,可用于调控外源基因的表达.此调控作用是由一般碳源/解及碳源特殊又重机...
蛋白表达：蛋白表达系统
Paul Berg在他1980年的诺贝尔中说：“毫无疑问,重组DNA技术的应用和发展将我们进入新型药物开发的起点”.2年后,世界上第一个生物技术公司 Genentech推出了她的第一个产品：胰岛素――一种小肽,该公司的研究者成功的将i 工程构建成一个生产胰岛素的工厂.从那以后,科学家们已经发展了各种各样的细胞依赖型或者不依赖细胞型的表达技术.随着蛋白和其它生物药品变得越来越普遍,工业界和学术界的研究者们继续改善表达技术,尤其是表达一些复杂的蛋白,这些蛋白只有磷酸化、糖基化、泛素化和其它一些翻译后修饰后才能...
不搞清这7个关键问题，别说你会治「幽门螺杆菌感染」
专家一致认为生长在胃窦部黏膜内的幽门螺杆菌，符合鉴定传染病病原的Koch，是一种传染病菌，可在人与人之间，现已明确与下列多种疾病的发病有关。...