DNA提取与纯化:大白鼠肝DNA的提取与鉴定

  (十二烷基磺酸钠)细胞膜和核膜,并使蛋白质变性,将核蛋白中的DNA与蛋白质分开,EDTA及SDS细胞中的DNA酶的活性.用酚、氯仿抽提的方法进一步除去蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀除净小化合物.提取出的DNA制品进一步用含溴乙锭的琼脂糖凝胶电泳加以鉴定.

  三、材料(一)仪器研钵;研钵棒;刻度离心管;普通离心机;小试管;Ep管(二)试剂1、生理盐水;2、裂解缓冲液;3、苯酚:氯仿混合液(1:1);4、无水乙醇;5、70%乙醇;6、TE缓冲液;7、溴酚蓝载样液;8、溴乙锭溶液;9、TBE缓冲液

  四、操作步骤1、处死大白鼠,迅速取出大白鼠肝脏,用生理盐水洗去附着血液,用滤纸吸干血水后称量0.5g肝实质组织放于研钵中.2、研钵中加入1ml裂解缓冲液、少量石英砂,研磨至匀浆,再加入2ml继续研磨至匀浆.3、取刻度离心管一支,加肝匀浆至1.0ml,再加入等体积苯酚:氯仿混合液抽提,每次抽提以中等大小的力来回振荡5min,然后离心3000r/min,10min,水相吸入另一干净的小试管中,抽提重复3次『注1』.4、往乘有上水相的小试管中加入2.5倍体积的冷无水乙醇,轻轻混匀,此时可见有白色絮状沉淀,此即DNA粗制品.5、将试管中的上清液倒出,保留沉淀.用70%的乙醇洗涤沉淀2次,洗涤时动作要轻柔,同上法弃上清保留沉淀『注2』.6、加入0.25mlTE缓冲液溶解沉淀.7、取30ml沉淀溶解液放入Ep管中.8、向Ep管中加入溴酚蓝载样液5ml,混匀后即为鉴定所用样品.9、取琼脂糖0.3g,TBE缓冲液15ml加入锥形瓶中,加热锥形瓶使琼脂糖充分熔解后,加入10ml溴乙锭,混匀后将胶液倒入已放置样孔梳的胶板上.10、待胶板凝好后拔去样孔梳,取15ml样品液加入样孔槽中.11、将加好样品液的胶板放入乘有TBE缓冲液的电泳槽中,样孔槽位于阴极侧,盖好电泳槽盖后通电,调节电压100V电泳40-60min.12、泳毕,拿出胶板,在紫外光灯下观察结果.

  注1:吸水相时不要将界面上的变性蛋白质混入,抽提3次后一般有机相和水相界面上的变性蛋白质极少,基本看不见,若变性蛋白质仍较多,可增加抽提次数.实验中使用的吸取DNA水溶液的滴管管口需粗而短,并烧成钝口.注2:最后一次弃上清时,尽可能去尽上清.相关阅读:

手机正文底部

您可以还会对下面的文章感兴趣:

  • 不搞清这7个关键问题,别说你会治「幽门螺杆菌感染」
  • 上海师大与康奈尔大学两校教授联合发布菠菜栽培种基因组草图
  • 质粒提取:质粒实验常见问题分析
  • Sci Rep:突破!利用CRISPR-Cas9技术开发出帕金森疾病新型筛选工具
  • DNA提取与纯化:琼脂糖凝胶中的DNA的回收:DEAE-纤维素膜电泳
  • 最新评论