质粒提取:聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA

  这种方法最早用Richaed Treisman参照Lis的工作而设计.Lis是最早用聚乙二醇(PEG)分离不同大小DNA的人.Treisman法被广泛用于碱裂解法制备的质粒DNA的纯化.首先将粗提质粒DNA用氯化锂处理沉淀大RNA,用RNA酶消化污染的小RNA.然后用含PEG的高盐溶液沉淀大的质粒DNA,使短的RNA和DNA片段留在上清中.沉淀下来的质粒DNA用酚:氯仿抽提及乙醇沉淀.这里介绍一种改了的Treisman法:用PEG和MgCl2溶液沉淀质粒DNA.

  PEG/ MgCl2 沉淀法与用柱层析和CsCl-溴化乙锭平衡离心纯化质粒DNA的主要区别在于:他不能有效分离带缺口的环状质粒和闭合的环状质粒.后两种方法用于纯化易产生缺口的特大质粒(>15kb)和用于生物物理测量的闭合环状质粒是首选.不过,用PEG/ MgCl2 沉淀法纯化的治理不仅可用于所有克隆中的酶学反应(包括DNA测序),还可用于高效转染哺乳动物细胞.

  4.小心倒去上清,导致管口,使液体流干.室温下用70%乙醇洗沉淀和管壁.小心将乙醇倒去,用真空抽吸器将管壁上残留的乙醇抽干.在纸巾上倒置数分钟,使无可见乙醇残留.但应使沉淀保持湿润.

  9.室温放置超过10min,然后于室温用微量离心机在最大速度离心20min,以回收沉淀的质粒DNA

  10.沉淀用0.5ml70%乙醇重悬以去除微量PEG,用微量离心机在最大速度离心5min以回收核酸.

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