质粒提取：煮沸裂解法小量制备质粒DNA

　　的丰富培养基中（ LB 、 YT 或 Terrific 培养液）,于 37 ℃剧烈振摇下培养过夜.为了确保培养物通气良好,试管的体积应该至少比细菌培养液的体积大 4 倍, 试管不宜盖紧,培养物应在剧烈振摇下培养.2、将 1.5ml 培养物倒入微量离心管,用微量离心机于 4 ℃以最大转速离心 30s ,将剩余的培养物贮存在 4 ℃.除去上清的简便方法是用一次性吸头或巴斯德吸管与一个真空管道和一个侧臂烧瓶相连.轻微抽吸,并使吸头接触液面.当液体从管中吸除是,尽可能使吸头远离细菌沉淀,以尽量避免沉淀杯喜道侧臂烧瓶中去.也可用吸管（或巴斯德吸管）和吸球除去培养液,并用吸头除去管壁上附着的液滴.未从细菌沉淀中除去所有培养液的后果是质粒不能被酶切割或不能完全切割.这是因为培养液中的细胞壁成分多种酶的活性.这个问题可这样解决：用冰预冷的 STE （菌液体积的 0.25 倍）重悬沉淀并离心.4、用 350ulSTET 重悬细菌沉淀确保细菌迅速完全地重悬于 STET. 将两个离心管的底部接触同时振荡,重悬效果更好.延长超螺旋 DNA 于热的时间会使其不可逆变性,所产生的环状卷曲 DNA 不能被酶切割,而且它在琼脂糖电泳中的迁移率为正常超螺旋 DNA 的两倍,难以被溴化乙锭染色.从细菌中用热裂解法提质粒时可能会看到微量的这种 DNA .但如果将裂解液在 100 ℃精确地放置所推荐时间,可使环状卷曲 DNA 的量减至最小.8、在上清中加入 40ul2.5mol/L 的乙酸钠（ ph5.2 ）和 420ul 异丙醇以沉淀核酸.振荡混匀溶液,并在室温下放置 5min .在离心机放置离心管时,最好养成总是用同一种方法在离心机中放置离心管的习惯,例如,按顺序放置,将离心管的塑料柄朝外.沉淀总是在离转头中心最远的离心管内壁聚集.知道 DNA 沉淀在什么地方,可以较容易地找到可见的沉淀,也就能有效地溶解看不见的沉淀.10、按步骤 3 所述除去上清,在纸巾中导致离心管使所有液体流尽.用 Kimwipe 或一次性吸头除去管壁上的液滴.11、于 4 ℃用 1ml 70% 乙醇漂洗核酸沉淀,再用步骤 3 所述的方法除去所有的上清.12、除去管壁上所有的乙醇液滴,敞开管口放置在室温下,知道酒精全部挥发,管壁上看不到液滴（ 2-5min ）为止.如果用干燥器或真空干燥的方法干燥 DNA 沉淀,在某些情况下它会变得难以溶解并且可能变性.将沉淀在室温下干燥 10-15min 对于乙醇挥发来说足够了,并且不含引起 DNA 脱水.A （胰 RNA 酶,无 DNase ）的 TE 溶解核酸,轻轻涡旋混匀,贮存于 -20 ℃.