DNA提取与纯化：人外周血白细胞DNA制备

　　，释出血红蛋白及细胞核，在反应体系中含一定浓度蔗糖，核膜内外的渗透压，以防止核膜破裂，通过离心等手段即可获得白细胞的细胞核。向核悬液中加入SDS核膜，并使DNA从核蛋白中解离，经蛋白酶K，酚/氯仿抽提等常规制备DNA程序，即可获得白细胞DNA。Triton X-100直接法，操作简便，经济，DNA得率高，可用于临床。1. 溶液Ⅰ(pH7.6)：0.32mol/L蔗糖；5mmol/L MgCl2；1％Triton X-100；0.01mol/L Tris-HCl (pH7.6)。5. 1×TE (pH8.0)：10mmol/L Tris-HCl (pH8.0)；1mmol/L EDTA-Na1. 取2~5ml外周全血，加9倍体积的预冷溶液Ⅰ，振摇约5~10分钟至溶液均一透明，于4℃3000×g离心10分钟。3. 弃上清，加5ml预冷溶液Ⅱ悬浮核沉淀，加SDS至终浓度0.5％和加蛋白酶K至终浓度为200μg/ml，混匀，65℃水浴保温5小时。4. 加1/2体积TE(pH8.0)饱和，混匀，旋转室温3分钟，再加1/2体积的氯仿/异戊醇，塑料管，轻轻充分混匀，于600×g室温离心3分钟，溶液分出两相，用大口塑料吸头吸取上层液于一洁净离心管中，反复抽提至界面清洁。6. 取上层水相，加1/3体积的10mol/L NH4AC和2倍体积的预冷无水乙醇，充分混匀，纤维状DNA即从溶液中析出。7. 用大口塑料吸头吸出丝状沉淀物，用70％乙醇洗涤1次，抽干，溶于适量1×TE(pH8.0)中，4℃贮存备用。