lncRNA想发好文章?这波新工具要知道

  为什么说lncRNA越来越难做,一方面是机制研究要求高了,另一方面lncRNA研究工具也在不断升级。

  nanoCAGE、MERFISH、SHAPE、PAR-CLIP是什么鬼?最近师兄打算尝试一下,就看老板愿不愿意割肉了!

  2017年lncRNA相关的基金项目为421个,总资助金额为1.77亿,明年的国自然就得从现在马上准备了。

  技术,不管新老,必定是基于lncRNA的作用模式,都知道lncRNA可在水平、后水平、翻译后水平参与调控,具体的可阅读:国科金写作,lncRNA的机制该怎么设计?

  没钱做测序或者芯片?没关系,可以靠数据库来完成,利用GEO和TCGA的测序和芯片数据,找到差异的lncRNA。

  研究lncRNA时首先要能试验(过表达和敲减),然后是细胞定位(locallization),然后根据预测的作用模式,开展实验,例如与RBP结合等。

  最火的基因编辑技术,问题是删除了lncRNA的基因,也会影响相同的其他本表达,这就比较棘手了。

  一个替换的模式是用dCas9,将不具有核酸剪切活性dCas9(deadCas9)与负责激活、、表观调控和荧光表达等蛋白相融合,可以实现对靶基因的水平及表观遗传的调控

  FISH只能定性,而定量版本就是smFISH,它是一种新的基因定量分析方法,能报告本丰度和空间定位。

  MERFISH是一个高度多重化的smFISH成像方法,可以在单个细胞中鉴定数千种RNA的拷贝数和空间定位,可谓高逼格的FISH技术。

  这种技术实现高通量的lncRNA表达分析以及起点的图谱分析,2011年由日本科学家发明。

  其依赖了具有光活性的核糖核苷类似物,例如4-硫尿核苷,在活体细胞中将其插入到新生RNA本中。在365nm紫外灯辐射的细胞中,光活性的核糖核标记的RNA被与RBP相互作用。RNA随即被转换成cDNA文库并且进行深入测序。

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