DNA提取与纯化：酵母DNA微量制备

　　1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培养液在30℃条件下培养细胞达最大生长量(过夜)。2) 将上述培养物移入螺盖离心管，用医用离心机或Sorvall SS-34转头以5000r/min离心5分钟，弃去上清液。3) 将细胞悬浮在3ml的0.9mol/L山梨醇-0.1mol/L Na2EDTA(pH7.5)溶液中。5) 用医用离心机或Sorvall SS-34转头以5000r/min离心5分钟，弃去上清液。6) 将细胞重新悬浮在5ml的50mmol/L Tris-HCl(pH7.4)-20mmol/L醋酸钠溶液中。11) 将上清液转移至干净的塑料离心管中，室温下加入两倍体积的95％乙醇，混匀，以5000～6000r/min离心15分钟。12) 弃上清液，将沉淀物干燥，然后悬浮在3ml TE缓冲液(pH7.4)中，此操作可能需要几个小时。13) 用Sorvall SS-34转头以1000r/min离心15分钟，将上清液转移到一个新试管，弃沉淀物。15) 加入一倍体积的100％异丙醇，轻轻混匀，取出呈松散纤维状的沉淀物，无需离心，让其自然干燥。16) 将沉淀物悬浮在0.5ml TE缓冲液(pH7.4)中，置4℃保存。酵母DNA的最终浓度约为200μg/ml。如果最后的溶液混浊不清，用异丙醇再次沉淀DNA或用Sorvall SS-34转头以1000r/min离心15分钟。3) 将细胞悬浮在0.5ml的1mol/L山梨醇-0.1mol/L Na2EDTA(pH7.5)缓冲液中，转动一支1.5ml离心管中。6) 弃上清液，把细胞悬浮在0.5ml的50mmol/L Tris-HCl(pH7.4)-20mmol/L Na2EDTA溶液。11) 将上清液转移到一洁净微型离心管，室温下加入等体积的无水异丙醇，混匀，放置5分钟。短暂离心(10秒钟)弃上清液，让沉淀自然干燥。14) 加0.03ml的3mol/L醋酸钠，混匀，用0.2ml的无水异丙醇沉淀，再短暂离心收集DNA。15) 弃上清液，自然干燥，用0.1～0.3ml TE缓冲液(pH7.4)重新悬浮DNA。16) 在使用性内切酶酶解DNA之前，有必要将最终浓度溶液离心较长时间(15分钟)以便除去可能酶解的不溶性物质。