1、取1ml目的菌菌液至1.5ml的EP管中,5000r/m离心5分钟弃上清,菌体加入500μl水洗涤一次,5000r/m离心5分钟,弃上清,向菌体中加入200μl悬浮缓冲液.2、在200μl悬浮缓冲液中加人55℃Tirs饱和酚200μl和10%的SDS 45μl混匀,在微型蜗旋混和仪上混匀,55℃温浴15分钟,并且不断振荡混匀.4、加入等量的氯仿/异戊醇抽提,12000r/m离心5分钟,转移上层水相至新管,反复抽提至界面.5、取上层水相加入0.1倍的3M醋酸钠和2.5倍体积的无水乙醇混匀于-20℃放置2h沉淀DNA.6、12000r/m离心20分钟,沉淀DNA弃上清,用预冷的的70%的乙醇洗2次,在室温下晾干,加入40μl无菌水溶解,-20℃保存.
海洋浮游生物生物量较小,往往需要采集大量的海水样本,过滤收集特定粒径的浮游生物.这里介绍的是一种简单、快速、实用的符合基因PCR扩增需要的浮游生物模板DNA制备方法.1、取40 μL水样,与等体积0.25 mol/L NaOH混合,并于25 ℃温育过夜.2、99 ℃加热10 min,冷却至室温,简单离心收集溶液,依次加入8 μL 1 mol/L HCl,20 μL 0.5 mol/L Tris-HCl（pH 8.0）和10 μL 2% （v/v,体积分数）Triton X-100,混合并离心.3、将混合溶液再次在99 ℃加热10 min.4、制备的模板DNA溶液pH值 在8到9之间,可直接用于PCR扩增反应,不需要其它纯化处理.本方法用于海洋弧菌可行.三、褐藻
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