摘要：本实验用溶血空斑实验进行了抗体产生细胞的检测。取绵羊细胞免疫的小鼠脾脏，制成脾细胞悬液，与一定量的细胞(绵羊细胞)和补体结合，注入自制的小室内，经37℃孵育后，单个散在的抗体形成抗体，抗体与周围的绵羊红细胞(抗原)结合，并在补体参与下，使绵羊细胞溶解，结果在抗体形成细胞周围形成可见的圆形透明溶血区——溶血空斑。计算溶血空斑数目，则可推算脾内存在的抗体产生细胞总数。
1) 小鼠免疫4天后，颈椎脱位处死，取脾脏，去除脂肪组织，放平皿内，用冷Hanks液洗1—2次。
2) 取出脾脏研钵中研碎，加Hanks液2—3毫升，用吸管反复吹打数次，使细胞分散。将此细胞悬液经4—8层纱布过滤，1500转/分离心5分钟，弃上清。
如细胞太多，可加蒸馏水4毫升迅速混匀，半分钟后立即加入等量Hanks液混匀1000转/分离心10分钟，弃上清。
3) 沉淀细胞用Hanks液洗1—2次，弃上清后，加Hanks液使总量达5毫升。用乳头吸管吹打使沉淀细胞悬起混匀，此即为50倍稀释的脾细胞。
4) 取此悬液0.1毫升放另一小试管中然后加0.9毫升Hanks液使成500倍稀释的脾细胞悬液。
取洁净(无油)的载玻片，粘透明胶带，在胶带上薄涂一层凡士林(勿涂到小室内)，然后用镊子取两个盖片，分别放在其上，制成两个小室。用镊子尾端将盖片压平贴牢(保持小室一定体积)。用凡士林将盖片底端(其中的任一端)封住，顶端作为注入细胞混合液。
取小试管一只，用1毫升吸管吸取0.2毫升细胞悬液，用另一吸管吸取0.2毫升500倍稀释的脾细胞悬液，混匀即为被检的细胞混合悬液。
用100ul的微量加样器吸取被检细胞混合悬液，于小室开口一端轻轻将液体注满小室(勿使气泡产生，勿使液体外溢)，记录实际注入的细胞悬液微升数(约70ul)
观察空斑并计数两个小室出现的溶血空斑数。对模糊不清的空斑可在低倍镜下检查，真正的溶血空斑必须中心有一个淋巴细胞，周围为透明区。
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