摘要：抗体实验中,各种样品条件如何选择,如：如何选择一抗,二抗,一抗的稀释比例,同型对照,阳性对照等等.
请先确定您要检测的种属和使用的实验方法,然后查找相关产品,根据说明书上描述的“适用种属和实验方法”来确定合适的抗体.如果说明书中有明确您要检测的种属和实验方法均经过检测,则您可以放心地购买该产品.
为了增加性、降低背景：可以选择Fab段的抗体(去除Fc段的)、经过标本来源种属血清吸附的的二抗
如果说明书中有推荐的稀释比例,请按照该稀释比例进行实验.但是由于标本类型、实验条件、操作等各种因素的影响,推荐浓度仅作为参考.实验者需要在推荐浓度周围进行多个浓度梯度的实验,从中发现最佳的稀释比例.
如果说明书没有推荐稀释比例,仅注明“Useatanassaydependentdilution”,就需要做大量的预实验来摸索最佳的比例了. 下表列出的纯化抗体抗体用于不同实验方法时常用的工作浓度,可以作为预实验的参考.未纯化的抗体一般在说明书中不会标明抗体的浓度,因为大部分全抗血清、培养上清或腹水形式的产品浓度都是没有经过测定的.如果未纯化抗体产品的说明书中没有标明其中性抗体的浓度,实验者可以参考下表中“估计浓度”确定各 种实验稀释比例.
同型对照的主要目的是确定一抗的结合是性的,而不性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用.同型对照要与一抗的来源、Ig分型和标记完全一 致.例如：一抗是FITC标记,其抗体分型是小鼠的IgG1,则同型对照要选择是FITC标记的小鼠的IgG1.这里如同使用流式抗体一样,同样的不可离开说明书.
绝大部分的同型对照产品都是单克隆抗体,因此不适用于作为多克隆抗体的对照(因为多抗含有多种IgG的亚型).
阳性对照的使用是一个实验中确定抗体及检测系统是否正常工作的依据,也是确定待测标本中是否存在待测蛋白的一个依据!尤其是检测的标本是不确定是否有待测蛋白表达时.因此当实验没有阳性结果出现时,最好的选择是实验合适的阳性对照.
看看说明书中是否有Abreviews.任何被其他客户成功检测的组织、细胞或者裂解物均可以作为合适的阳性对照.
根据说明书上的Swiss-Prot或Omnigene数据库来查找.这些数据库经常会列出该蛋白表达的组织,这也可以作为合适的阳性对照!
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