一直有同学在尝试流式检测凋亡,一直有同学在问怎么分析大量似是而非或者一塌糊涂的流式“凋亡”数据,一直有同学指着荧光图里的各种各样的 “AP”、“subG1”夸夸其谈.关键问题在哪里呢?我曾经不止一次跟帖阐述过流式检测凋亡的强性,但是效果很不好,所以单独开一个说明贴,以后我不再跟帖解释.版主可以考虑置顶,以后有新同学不知道就看看,尽早决定能不能上流式测凋亡.
在进一步理化处理(样本制备)下,凋亡细胞易受影响而破损,未凋亡或准凋亡细胞易受影响而发生短暂或永久的凋亡变化.所以制备过程极易造成假阳性和假阴性,又容易形成弱荧光区域严重的不可消隐的延散性干扰.原代分离的实体组织的细胞样本、原代分离培养的细胞样本、贴壁生长的传代细胞样本都很难避免上述情况的出现,即不适合做流式凋亡检测.只有离散组织样本(血细胞)、个别极易分散的组织样本(脾、胸腺等)、悬浮生长且极易分散的细胞样本能满足流式凋亡检测的制备要求.注意,这里说的是所有的在流式上进行的凋亡检测,不存在有的样本不能做PI单染却又可以做AV或者MTP的情况,要不就都能做,要不就都不能做,决定结果的是细胞的底子而不是方法本身.
有同学会问,你说了这么多原则的东西,但是我的样本好像行啊,我不管我就做了,怎么知道我的数据可不可信呢?
附图是发生典型凋亡但是又没有细胞,制备过程不会导致假阳性和假阴性,因此完全满足流式凋亡测定的严格要求的case,细胞类型为新鲜分离的胸腺细胞,凋亡处理因素为gamma射线.尽管是PI单染,但是这样的样本做AV-PI、MTP等流式凋亡检测肯定也是没有问题的.凡是不能得到这样或者勉强近似结果的样本统统是无效数据(即使考虑到有些细胞群落个体DNA含量具异质性),同时回头说明同类样本不符合流式凋亡检测的条件,不要再费神做无用功.
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