淋巴细胞增殖和分化是机体免疫应答过程的一个重要阶段.因此,检测淋巴细胞增殖水平是细胞免疫研究和临床免疫功能检测的一种常用方法.
T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝原受体,在性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖.植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA),抗CD2、抗CD3McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖;而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS,对小鼠有作用)则刺激B细胞发生增殖;美洲商陆(PWM)、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均有刺激作用.最近发现,integrin家族中VLA组中某些受体与相应配体结合后也能活化T细胞.目前临床上最常选用 PHA刺激PBMC,根据形态学或氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入率测定T细胞的增殖水平.
2. 加入96孔培养板中,1～2×105细胞/100μl/孔,每组设3孔.加入最适剂量PHA,100μl/孔,同时设不加PHA阴性对照.如观察细胞因子(如IL-2)或其它刺激物(PMA)对增殖功能的调节作用,则根据加入因子的浓度而确定加入量,一般每孔最终体积为200μl.
2.PHA、ConA、PWM、LPS等在正式实验前均需摸索最适剂量或亚适剂量.犛I于厂家和批号不同丝裂原作用常有很大差别,如Wellcome公司PHA终浓度最适剂量为1～3μg/ml,而广州医工所PHA约为20～100μg/ml.
3.根据实验需要,对不同种(人、小鼠、大鼠、兔、狗等)不同来源淋巴细胞(胸腺、脾脏、淋巴结、扁桃腺、外周血等)均应进行最适细胞浓度、犈`养时间和刺激物浓度的摸索.
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