摘要：细胞受体结合免疫测定法是根据CIC可与某些细胞表面的Fc受体或补体受体结合而建立的细胞技术.
细胞受体结合免疫测定法是根据CIC可与某些细胞表面的Fc受体或补体受体结合而建立的细胞技术,这类方法有灵敏度较高,性较强等优点,但需进行活细胞培养或细胞分离,影响因素多,重复性较差,目前仅适用于实验研究.此类技术有多种方法.
Raji细胞是从Burkitt淋巴瘤患者分离建株的B淋巴细胞系.可在体外连续传代培养,细胞表面没有膜免疫球蛋白,Pc受体的亲和力很低,但有 C3、C3b和C3d受体及Clq受体,而且不易脱落.因此能使结合补体的IC吸附在细胞上,然后再于反应系统中加入荧光素或i125标记的抗人IgG抗体,使其与结合在Raji细胞上的IC中的IRC反应,计算Rail细胞上结合的IC中渗入的核素量,即可判定IC的存在与含量.
(1)Raji细胞悬液 将Raji细胞培养在含20%小牛血清的RPMI-1640培养液中2-3d后即可收集应用,该细胞培养时不贴壁、不结团,生长容易(一般3d即可传一代),培养条件不苛求.但pH值应在6.5左右,超过pH7.0则生长不良.收集细胞时要计数和检查活细胞,台盼蓝排除试验要求活细胞在95%以上.
(10)用热变性IgG40ug溶于50uL新鲜混合人血清中,然后倍比稀释成10个稀释度,按上述方法操作测定cpm.
以热聚合IgC的含量为横坐标,cpm为纵坐标绘制标准参考曲线.自参考曲线查出IC中IgC的ug数,按ug/mL报告.
(1)Raji细胞有时也带有Pc受体和表面膜免疫球蛋白,为使实验结果反映真实情况,应预试条件,同时在实验中加阴性对照.
除此以外,细胞受体结合免疫测定方法中的血小板凝集试验亦用于实验研究.其原理是免疫复合物与血小板相互作用后引起血小板表面发生改变,导致血小板凝集(有人认为血小板凝集与其表面Fc受体活化有关).试验中必须采用新鲜分离的有活力的血小板,因为在IC存在时,血小板表面的改变有赖于其代谢状态.除IC外,高浓度的游离免疫球蛋白与血小板表面抗原反应的抗体和其他物质,如荷电、蛋白水解酶和某些粘病毒也可使血小板聚集;Clq、IgM、RF能IC引起的血小板聚集;待检血清于试验前加热灭活,会使其血小板凝集滴度升高或降低.
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