抗体抗原实验:多克隆抗体的免疫电泳

  摘要:本文介绍了多克隆抗体免疫电泳(immune electrophoresis)的原理及操作流程。

  免疫电泳又称为或免疫球蛋白电泳技术,这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白IgM,IgG,IgA含量水平的实验方法。在这项实验技术中,首先利用蛋白质的量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离,然后将性的抗体引入到与电泳方向平行的凹槽中,在抗原和抗体的扩散过程中,抗原和抗体适当比例的结合会导致沉淀的产生。0.85%盐不仅可以终止扩散过程也可用于洗去未结合的蛋白,抗原和抗体结合所形成的沉淀线即可以观察也可利用染色方法观察。

  免疫电泳技术不仅可用于血清或尿样中单克隆抗体的鉴定,也可用于其它方面,比如免疫复合物的筛选、各种异常丙种球蛋白血症的识别和鉴定等。免疫电泳技术也是进行蛋白质常规评价的一种可靠,精确的实验方法,可观察蛋白质结构的变化和浓度的改变。

  将琼脂和电泳缓冲溶液混合放入90℃水浴加热至溶化,制成1%琼脂,将琼脂在冷却前铺在水平玻璃板上,待冷却至室温后,按图用内径4毫米的打孔器打孔及制作凹槽。

  将用电泳缓冲溶液稀释的4%-5%的抗原用滴管小心放入小孔中,将胶板放入电泳槽中并用润湿的滤纸将胶板和电泳槽中的缓冲溶液相连。盖上电泳槽盖,接通电源,6V/cm通电至前沿移动约35mm,时间约为1小时,利用示踪染料判断移动距离。

  将胶板移出电泳槽并放在水平上,用滤纸润干胶板凹槽中的缓冲溶液,在凹槽中加入适量的抗体(0.2ml~0.25ml),注意抗体不能溢出凹槽以避免污染.将胶板移至含有叠氮化钠且有一定湿度的盒内,加盖密封后在30℃水浴扩散至少10小时后,移至0.85%盐水中以终止扩散并洗去未结合的蛋白。

  地址:陕西省西安市灞桥区新寺569号唐都医院临床教学楼312室 邮箱:联系电话 传线号 技术支持:陕西奈特星网络发展有限公司

手机正文底部

您可以还会对下面的文章感兴趣:

  • 基础免疫实验:免疫沉淀反应几种实验方法
  • 免疫组化:PTX3在人类急性心肌梗死组织中的表达
  • 抗体抗原实验:半抗原——载体连接方法
  • 免疫组化:B淋巴细胞膜表面免疫的检查
  • 免疫组化:石蜡切片免疫组化染色步骤
  • 最新评论