免疫检测分析:ELISA竞争法普遍存在的操作问题

  竞争法的原理:酶标抗体与样本抗体在同样的体系中,与固相抗原竞争结合是等比关系.原论上讲,应该先将样本与酶标抗体先行混匀,然后加入反应也进行.但实际工作中并非如此,都是分开加入反应孔.这样会造成先加入的先结合,与后加入者并不是公平的关系,因而也不符合等比原则.特别是在放置时间长,且温度高的情况下,对结果有很大的影响.

  第二军医大学长海医院对此造成的影响进行了研究.将阴性标本94份并用生理盐水进行1:30稀释,在加入标本后按下表时间放置后再加入酶标抗体,然后检测结果如下:

  从上表可以看出,如果同时加入标本与酶标抗体,没出现假阳性现象.2分钟后再加入酶标抗体,由于标本比酶标抗体先结合了两分钟,因此出现了.

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