基础免疫实验:间接炭凝反应原理及方法

  摘要:间接炭凝集反应是以炭粉微粒作为载体,将已知的抗体球蛋白吸附于这种载体上.二者发生性结合,形成可见的炭微粒凝集块.

  间接炭凝集反应简称炭凝.它是以炭粉微粒作为载体,将已知的抗体球蛋白吸附于这种载体上,形成炭粉抗体复合物,当炭血清与相应的抗原相遇时,二者发生性结合,形成可见的炭微粒凝集块.

  炭粉粒子最好大小在0.12mm~0.15mm,目前市场上出售的炭粉均不合要求,必须过300目/寸的标准筛以300r/min离心去沉淀,再以3 000r/min离心去上清,收集沉淀物;

  取湿炭粉0.25g(干粉0.10g),加入经56℃~60℃灭活30min的稀释高免血清3ml,充分摇匀,置37℃致敏30min,不时摇动,取出后用pH 7.2 PBS液洗涤3次.最后一次用含1%硼酸和1%兔血清的PBS液洗涤一次,离心去上清,再取此液3ml,混匀即可.同时以正常血清致敏的炭粒处理,以作对照.

  2、取洁净玻璃板一块,以玻璃铅笔划成小格,加被检标本0.10ml,再加免疫炭血清0.05ml,充分混匀,静止1min~5min,判定结果.

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