有多种方式可用于卵白质的碘标识表记标帜,如使用化或酶促法通过氧化对卵白质进行碘化是常用的方式.当使用化学氧化法时,碘化钠(NaI)遇强氧化剂,碘离子被氧化为碘,所生成的碘可取某些基团进行卤化反映.卵白质可进行卤化反映的基团次要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行碘化.正在使用氯胺T(Chloramine T)法的尝试中,所用的氧化剂(1,3,4,6-tetrachloro-3α, 6α-diphenyl-glucoluril)是溶于强挥发性的无机溶剂中.该溶剂插手试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和卵白质液插手包被好的试管中,反映完成即将夹杂液移入他管,以终止反映.
*留意:125I 对健康无害,需要办法.正在使用125I 应先相关同位素学问,及正在相关部分的监测下,按放射线同位素的使用及措置要求进行.
6.通过凝胶过滤层析分手将碘化抗体取碘化酪氨酸分手.将反映夹杂液上1ml的凝胶过滤层析柱,分部收集洗脱液100μl/管,碘化抗体正在起头的组分排出.使用γ-记数器监测各组分;
3.将1-5μl含约10000cpm 的样品,精确的点到每一张滤纸的核心,正在室温下待干;
1.用氯胺T法进行碘化,也可正在大约pH 7.0的缓冲液中进行.均必需反映系统中无还原剂存正在.
2.若是氧化反映毁伤卵白质,可将氯抗体取异硫氰酸荧光素( FITC)偶联)胺T量削减到0.02mg/ml, 并将偏沉亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml.
3.孙册,朱正美及顾天爵 放射性标识表记标帜凝固素《糖复合物生化研究手艺》浙江大学出书社 1999 pp.501-504
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