1、Q:金标试纸条包被单抗,检测线上包被多抗来检测抗原是否可行呢,用饱和硫酸铵纯化多抗能达到要求吗?
A:多抗不是很合适,有条件还是多用单抗.确实要用,多抗一般要过纯化柱纯化,以提高抗体的性.
2、Q:我需要流速为135s的NC膜,可厂家都是孔径,而且0.45微米的多,请问大家我的应该买多大孔径的?
A:NC膜大都是以每4cm膜水的层析流速多少秒来定义孔径的,根据流速的快慢常用的有90,120,135,180,240等膜,流速时间越大,孔径越小.最普遍使用的是135s的膜,根据你的需要,你直接告诉厂家订135s的膜就可以了.
3、Q:最近我在试验中遇到胶体金在NC膜上层析的速度明显低于水在的层析的速度.我用的是whatman的 NC膜,胶体金复溶液用的是1%BSA和1%蔗糖的PB溶液.不知问题出在何处,才出现该现象.应该如何解决?
(1)NC膜本身的原因,不同厂家的NC膜组成成分上有一定的差异(主要是聚合物和表面活性剂的量不同),因此在其他条件不变的情况下尝试其他厂家的膜也许问题就可得到一定的解决;
(2)金效果不好,样本流经金垫过程中胶金不能很快的也是造成在爬行过程中金样分离的一个很重要的原因;
5、Q:我做的金标试纸条检测线显色后,慢慢的颜色就会褪掉,放置几个小时后,为什么有时候会褪色?
A:主要是金标记物解离造成的,也就是说在你现在的系统中你的金标记物不稳定.可以尝试加入一些性的蛋白或高聚合物或糖类,如BSA、Casein、PEG、PVP、蔗糖等.此外缓冲液也可能造成此类现象发生.
(5)水的质量同样重要,是否达到18.2兆,水的离子强度对标记起着志关重要的作用等,想要金标做的很好,必须严格把关,每个环节都会出现这样或者那样的问题,所以出现假阳性是最常见的金标问题
9、Q:浸金,37度烘箱干燥1h,没有抽真空的机器,在干燥的时候,随手用一个塑料手套垫在金标垫下面.有几次由于烘箱里面的风把手套吹的盖在金标垫上,发现盖住的部分胶体金都变成了灰白色,而没有盖住的部分都是正常的紫红色,这是为什么?
试验2:将支架清洗干净,去除杂质. 现象依然存在,且无好转.在干燥时间内,每隔一段时间就将金垫取出,发现其干燥规律. 基本确定为2).
解释:由于接触处的空气流动较不接触处少,那么干燥过程中非接触处的水分利于挥发,更快变干.而待干燥的金溶液会向已干燥区域不断迁移,逐渐降低了接触处的金溶液浓度,结果该处颜色变浅直到灰白.
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