. 装满10m1冷的新配制的4%多聚甲醛(PFA)的10m1塑料注射器,并附有1英寸(2.54cm)、25号针头(每只鼠一个)
7.将大块的器官或肿瘤取出并切成小块,并把它们浸泡于4%PFA中.在PFA中固定的时间不能超过24小时.
1.用3%(体积分数)的过氧化氢(H202)PBS溶液在室温下孵育15分钟,以除去内源性过氧化物酶活性.用lXPBS洗涤两次.
1.用DAKO抗体稀释液来稀释一抗(对于多抗比例为1：1000),并添加约100ul到切片中(足够完全覆盖切片的量).在宅温下孵育1小时,用1XPBS洗涤切片两次.
2.向切片中添加大约100/11(足够完全覆盖切片的量)的预先稀释的多克隆二抗.在室温下孵育30分钟,用1×PBS洗涤切片两次.
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