免疫细胞检测技术：NK细胞活性测定：同位素法

　　将用同位素3H-TdR标记的靶细胞与淋巴细胞共同培养时,靶细胞可被NK细胞杀伤.同位素便从被杀伤的靶细胞中出来,其的量与NK细胞活性成正比.通过测定靶细胞3H-TdR的率即可反应NK细胞的活性.

　　无菌取脾,置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中,用镊子轻轻将脾撕碎,制成单细胞悬液.经200目筛网过滤,用Hanks液洗3次,每次离心10min(1000r/min).然后将细胞悬浮于2mL的完全培养液中,用台酚兰染色计数活细胞数(应在95%以上),最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为1×107个/mL.

　　在96孔培养板中每孔加100μL标记的靶细胞,实验孔加100μL效应细胞,空白对照孔加100μL培养液,最大孔加100μL 2.5% Triton X-100.每个样品设3个复孔,置5%CO2、37℃培养箱内温育4h,用多头细胞收集器将细胞收集在玻璃纤维滤纸上,用液体闪烁仪进行测量.

　　NK细胞活性需进行数据转换,X=Sin-1 ,式中P为NK细胞活性,用小数表示.在进行方差分析时,需按方差分析的程序先进行方差齐性检验,方差齐,计算F值,F值< F0.05,结论:各组均数间差异无显著性;F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计;对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态或方差齐要求后,用转换后的数据进行统计;若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的,改用秩和检验进行统计.