抗体抗原实验：抗体的酶标记法

　　摘要：抗体的酶标记法是应用偶联剂使酶与抗体结合.即通过应用单、双或多功能基试剂,分别与大的抗体所存在的功能性基团发生反应,生成酶-抗体偶联复合物.

　　抗体的酶标记法是应用偶联剂使酶与抗体结合.即通过应用单、双或多功能基试剂,分别与大的抗体所存在的功能性基团发生反应,生成酶-抗体偶联复合物.不同的酶-抗体复合物制备方法中,最广泛应用的是第一步加入戊二醛的方法,本法与其它偶联方法相比,具有操作简单、反应条件温和,及实用面广等长处.

　　亲和纯化的多克隆抗体或生物化学纯的单克隆抗体(5mg/ml PBS液或0.1 mol/L磷酸缓冲液 pH6.8)

　　用以标记的酶(EI,有商品供应):辣根过氧化物酶( HRP,纯度为A430/A275 > 3),黑曲霉葡萄糖氧化酶,小牛肠碱性磷酸酶(AKP),或大肠干菌β-D-半乳糖苷酶均可选用,但以HRP最为常用.

　　5.加入2 mol/L甘氨酸液使最终浓度达到0.1 mol/L,混合液室温放置2小时,以封闭的醛基

　　1.如果参与偶联的氨基位于抗体和抗原的结合位点,则在偶联反应中,被标记抗体的亲和性能会不同程度的受到;

　　2.主要影响偶联成功率的原因是在反应混合液中有游离氨基存在,游离氨基容易和戊二醛反应,因而干扰蛋白质的交连.因此,必须用绝对不含有机物的水配置缓冲液,并且反应混合液要在偶联前对该缓冲液充分透析,是反应成功的要点.