2、打开储液箱,倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液.打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS或FACSFlow),合上压力阀.确实盖紧桶盖,检查所有管是否妥善安置.
3、将FACSCalibur开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5-10分钟.排出过滤器内的气泡.
8、做过分选后,每次开机后需冲洗管道:向分选装置上装上两个50ml离心管,不接通浓缩系统,摁下右下角白色按钮开始冲洗.待自动停止后接通浓缩装置,同上法冲洗一次.
2、选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot,绘出一个或多个Dot Plots(点图).从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源,并确定适当的x轴和y轴参数.
1、从苹果画面中选取CELLQuest,进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件.
6、在Acquisiton Control对话框中,选取Acquire,开始获取细胞.在以下的仪器调整过程中随时选取Pause,Restart以观察调整效果.未完全调整好之前不要去掉SETUP前的“?”.
8、在Threshold 对话框中选择适当的参数设定Threshold,并调整Threshold的高低,以减少噪音信号(细胞碎片).一般做细胞表型时用FSC-H而做DNA时用FL2-H.Threshold并不影响检测器对信号的获取,但可改善画面质量.
9、从屏幕左列绘图工具中选取Region(区域),并在靶细胞周围设定区域线,即通常所说的门.圈定合适的细胞群可使仪器调整更为容易.
10、在Detectors/Amps对话框中,调整荧光检测器(FL1, FL2, FL3, FL4等)的倍增程度.根据所用的荧光阴性对照样品调整细胞群,使之分布在正确的区域内.
11、在Compensation对话框中,根据所用的调补偿用标准荧光样品调整双色(或多色)荧光染色所需的荧光补偿.比如应该为FL1+ FL2- 的细胞群却分布在FL1+ FL2+区域内,则需调大FL2-?%FL1中的“?”,并从FL1-FL2点图中观察新的调整是否恰当
13、调整好的仪器设定可在Instrument Settings对话框中储存,下次进行相同实验时可调出使用,届时只需微调即可.
1、从苹果标志中选择CELLQUEST,新视窗出现后从File指令栏中选择Open,打开预设的获取模式文件.
7、将样品试管放至检测区,在Acquire Control对话框中选取Acquire以启动样品分析测定.
9、当一定数目的细胞被测定后,获取会自动停止,并会自动存储数据.重复步骤7,继续分析下一个样品,直到所有的样品数据分析完毕.
10、当所有样品分析分析完毕,即换上三蒸水,并将流式细胞仪置于“STANDBY”状态,以激光管.
5、此时仪器自动转为STANDBY状态,换2ml三蒸水.必须在仪器处于“STANDBY”状态10分钟后再依次关掉计算机、打印机、主机、稳压电源,以延长激光管寿命,并确保应用软件的正常运行.
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