基础免疫实验：溶血空斑试验

　　摘要：本实验介绍了溶血空斑试验即小室液相法(Test of Plague Forming Cell)的基本原理及操作步骤。

　　溶血空斑试验，又称空斑形成细胞(Plague Forming Cell，PFC)试验，是一种体外检测抗体形成细胞的方法。将一定量洗涤过的绵羊红细胞注射入小鼠腹腔，四天后将小鼠，取脾脏制成脾细胞悬液，内含抗体形成细胞。然后将脾细胞、绵羊红细胞，补体混合孵育。由于PFC 所分泌的抗体和绵羊红血球结合形成抗原抗体复合物，在补体作用下可使红细胞溶解，于特制的小室内形成可见的溶血空斑。一个空斑即代表一个抗体形成细胞。

　　将5%SRBC 0.4ml注射于小鼠腹腔，4 天后拉脱颈椎处死，取出脾脏放在已加入6ml Hanks液的平皿中。在100 目不锈钢网上研磨，过滤混匀，从中吸取lml加入试管中，加满Hanks液混匀，离心1000rpm，10 分钟。将沉淀的脾细胞恢复lml容积，即为约1×107/ml浓度的细胞悬液。

　　取无脂载玻片(75mm×25mm)，平置桌面上。用双面胶带在载玻片两端和中间各粘一条，然后再覆盖上同样的载玻片，即形成两个小室。将此双层玻片的一侧长边浸入融化的石腊池中以封闭小室的一边(无需浸入过深，以能封闭小室边缘为准)。

　　混匀后，用尖吸管灌注小室、蜡封、标记、平放于玻片盘内，置37℃孵箱30—45 分钟。