免疫组化：小鼠组织切片免疫组化实验步骤

　　摘要：免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

　　取500mlEDTA抗原修复工作液于1000ml烧杯中，在小功率电炉上加热，至似沸微沸(为了防止脱片)。将组织切片缓慢放入烧杯。继续加热，保持液体在微沸状态20分钟。将烧杯移开火源，室温下自然冷却后取出切片，蒸馏水洗1次3分钟，TBS洗2次每次3分钟。

　　4. 每张切片加一滴或50ul 3%过氧化氢溶液，室温下孵育10min， 以阻断内源性过氧化物酶的活性。 TBS冲洗3次，每次3min。

　　5. 除去TBS液，加一滴或50ul 一抗(灭活PLB免疫小鼠所得到的多抗，1:3000稀释)，阴性对照采用普通血清， 室温下孵育2小时，或4℃过夜。

　　7. 除去TBS液，每张切片加一滴或50ul 过氧化物酶标记的抗鼠/兔聚合物(试剂B)，室温下孵育30min，TBS洗3次，每次3min。

　　9. 自来水冲洗，苏木素复染10min，水冲洗。0.1%的盐酸分化，自来水冲洗，TBS返蓝。