免疫检测分析：免疫胶体金标记抗体及检测抗原

　　胶体金在光镜和电镜中均为有效的标记物,可以检测单一和多重抗原.胶体金在电解质中不稳定,但被蛋白质包被的胶体金是稳定的.一般常用免疫球蛋白或蛋白A包被胶体金,可作标记二抗进行免疫检测,本方法应用范围广,染色后的样品可以长期保存.

　　3.确定蛋白质包被的最佳浓度:将蛋白质作连续10倍稀释各1ml,加入5ml胶体金溶液,1分钟后加入1ml 10%氯化钠溶液,静止5分钟;以胶体金溶液为空白对照测定光吸收度,选择最低吸收值的蛋白质浓度用于正式包被.

　　4.取50ml胶体金溶液,用0.2M K2CO3调pH值为7.6,按照确定的最佳比例将蛋白质加入并快速混合,让蛋白质吸附2分钟后,加0.5ml 1%聚乙二醇,防止非性凝集;

　　6.弃去上清液,将包被的胶体金溶液用5 ml含1% BSA的PBS稀释, 经微孔滤膜过滤后,4℃保存.

　　3.将洗涤后的细胞与20ml(一般效价1:20)胶体金标记的山羊抗鼠Ig抗体在室温下孵育30-60分钟;

　　6.将载玻片细胞面向上置于放有湿润滤纸的培养皿中,加4滴50%硝酸银溶液和2滴明胶显色液,覆以盖玻片,放入60-65℃的温箱中,显色3-4分钟,直至玻片标本呈现金褐色为止;

　　3.胶体金颗粒的形成、大小和速度,均决定胶体溶液的稳定性,水质和玻璃表面对启动还原和稳定胶体十分重要,本过程制备的胶体金颗粒直径约为18-20 nm;

　　5.蛋白质包被胶体金时的相对最佳浓度要事先测定,测定最佳浓度时,胶体金溶液的pH值也要调节到pH7.6;

　　2.杨景山 主编(1990) 《医学细胞化学和细胞生物技术》 医科大学和中国协和医科大合出版社