摘要：血清中有免疫复合物存在时,可与其本身的C1结合.将被检血清56℃加热1h,能结合的C1,空出补体结合位点.
血清中有免疫复合物存在时,可与其本身的C1(内源性C1)结合.将被检血清56℃加热1h,能结合的C1,空出补体结合位点.当加入豚鼠血清(外源性C1)及系统(致敏SRBC)时,CIC又可与外源性C1结合,使致敏SRBC的溶血被.
3、2%SRBC新鲜脱纤维羊血或Alsever液保存的羊血(4℃可保存3周),用生理盐水洗2次,第三次用缓冲盐水,2 500r/min离心lOmin,取压积红细胞用缓冲盐水配成2%悬液.为使SRBC浓度标准化,可将2%悬液用缓冲盐水稀释25倍,于分光光度计 (542nm)测定其透光率(以缓冲盐水校正透光率至100%).每次实验所用SRBC浓度(透光率)必须一致,否则应予调整.
5、豚鼠血清:取3只成年健康豚鼠血清混合分装,每管0.5mL,—30℃保存.用时取出一管,以缓冲盐水作1:100稀释.
4、试验管每管加被检血清0.1mL,对照各管不加血清,用缓冲盐水0.1mL代替.37℃水浴10rain.
6、将各管1 000r/rain离心3min,或置4℃待SRBC自然下沉后观察结果.以上清液与50%溶血管比色.
以50%溶血管作为判定终点.凡试验排比对照排溶血活性低1管或1管以上者,抗补体试验阳性,提示有免疫复合物存在.每次实验可用热聚合人IgC作阳性对照.
1、此方法性较高,可测出每毫升IC的限度为微克(Pg),甚至纳克(ng)水平.其缺点是任何水平上千扰补体反应序列的物质都能引起假阳性结果.补体旁途径的激活剂(如天然多糖、细菌内毒素等)将产生明显的抗补体活性,血清经过56℃加热,可能会改变某些IC的结构.因此,有人认为单独抗补体试验 阳性,尚不足以IC的存在.
2、混合豚鼠血清一般1:100稀释后应用.—30℃保存2周后或在夏季取血,豚鼠补体活性会有所下降.使用前可先滴定,选取0.1mL可引起50%溶血的补体稀释度.
5、被检血清应新鲜,无细菌污染及溶血.如当日不检测应置—30℃冻存.检测前置56℃水浴1h灭活,应严格控制加温温度与时间.
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