1、问:免疫荧光:用免疫荧光方法做同样的内容,组织切片和培养细胞,两者操作过程中有哪些不同?
(3)我的阳性对照采用的是阳性组织切片,阴性对照则分别是rabitt和rat的IgG,荧光标记物对照是PBS+荧光标记物.
(2)封片时是否用甘油缓冲液即可,还是用甘油和0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液等量混合封片?
(2)封片最好用甘油加0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液,后者能使玻片透明更亮;
(3)关于免疫酶染色,如果是用过氧化物酶做标记,就必须用3%H2O2以去除内缘性过氧化物酶;
(1)空白对照:如果你作的是石蜡切片的免疫组化,这一个对照必须有,目的是看自发荧光.脱蜡后直接在荧光显微镜下观察.
(3)抗原对照:标本加同种动物的未免疫血清,以PBS冲洗后,在加抗免疫球蛋白荧光抗体.因未免疫动物的血清中无性抗体,应呈阴性反应.
5、问:我做乳腺组织的免疫荧光染色,结果用激光共聚焦显微镜看很好,有阳性信号,阴性对照组也没有荧光,但是拿到荧光纤维镜下看,我的阴性对照组一片绿,像非性染色,到底哪个结果才是真实的呢?
参考见解:激光共聚焦显微镜的分辨率比普通荧光显微镜要高的多,出现上述现象首先要排除荧光显微镜的问题,如是不是紫外灯泡寿命到期了或者别的原因,荧光显微镜没有问题,那就以共聚焦显微镜的结果为主.抗体分装、及荧光显微镜观察结果是否一定要在暗室中进行实验.
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