免疫荧光：脊神经节双重染色

　　摘要：脊神经节是脊髓两侧的脊神经背根上的膨大组织,属感觉神经节.下文是脊神经节双重染色的结果.

　　脊神经节是脊髓两侧的脊神经背根上的膨大组织,属感觉神经节,内含许多假单极神经元胞体和平行排列的神经纤维束.神经元胞体(节细胞)呈圆形或卵圆形,大小不等,大的染色浅,小的染色深.胞核圆形,位于胞体中央,核仁明显.节细胞周围可见一层扁平或立方形的卫星细胞,其核圆或卵圆形,染色较浅,胞质不明显.

　　TRPV1是辣椒素性受体,最早发现于感觉神经元中,被认为是各种性刺激的整合器,主要表达于感觉神经元及其纤维,如背根神经节和三叉神经节,并参与多种生理病理过程.

　　PARS是蛋白酶激活受体,属于G蛋白偶联受体家族,人体内几乎所有细胞都有不同类型PARS的存在与表达.它可通过介导细胞外信号调节激酶信号转道通,引起细胞核反应,激活多种细胞因子.

　　采用呈现不同颜色的荧光素配伍,分别标记不同的抗体,再通过各自与同一切片上的相应抗原性结合而加以区别显示所建立起来的双重免疫荧光组化染色技术.常用的荧光素有异硫氰酸荧光素(FITC,呈黄绿色荧光)、罗丹明(RB200,呈红色荧光)和异硫氰酸四甲基罗丹明(TRITC,呈红色荧光).

　　C图示部分细胞同时表达有PAR2和TRPV1抗原,标记PAR2抗原的红色荧光和标记TRPV1抗原的绿色荧光呈色重叠,变色为荧光,如三角形箭头所示.

　　以酶催化不同底物呈现不同颜色产物,标示同一切片内两种不同抗原为理论基础所建立起来的双重免疫标记染色方法.

　　D图和E图用于显示组织中的两种不同抗原,采用两种不同底物/色素/酶系统：BCIP/NBT/碱性磷酸酶和H202/AEC/过氧化物酶,前者显色为灰黑色,后者为深红色,二者叠加显色为深棕色.

　　D图长箭头所示的是神经元胞体上只表达PAR1抗原,显色为灰黑色,短箭头所示的是卫星细胞表达TRPV1,显色为深红色,仅个别细胞同时表达有PAR1抗原和TRPV1抗原,深红色中可见灰黑色颗粒;E图长箭头所示的是部分神经元胞体单独表达PAR3抗原,短箭头所示的是卫星细胞单独表达TRPV1,显色为深红色,个别细胞同时表达两种抗原.