制备好免疫胶体金后,还需要将其稀释到一定浓度,并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品.一般来说,特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布.玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的,胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布,通常配方为1%Tween20+适量PVA.
免疫胶体金毕竟是含有生物活性,应用时还要面对千差万别的样品,原则上需要稀释在合适pH的缓冲液中.经验值是6-9.在这个范围内可选的缓冲主要有tris和PB,也不排除其他种类缓冲适用的可能.当使用的缓冲离子强度过大如超过0.2M时,有可能造成、层析不好或检测结果异常.离子的种类也因为免疫胶体金的生物不同而有诸多,例如钙调蛋白可能与Ca离子有关系.而卤素离子强度对胶体金稳定性似乎有特殊的作用,教科书式的NaCl调试最适标记条件就是例子.
这个其实是冻干工艺的理论基础,适用于胶体金干燥工艺,对冻干有研究的应该对这个工艺感觉很小儿科.抽真空是一个热力学吸热过程,实验表明免疫胶体金的真空干燥是一个先冷冻再的过程,十分类似冻干.无纺布材料的工艺由于干燥过程快,多数采用烤干的工艺,但是大的骨架作用仍然是对产品的速度和比率有很大帮助.常用大物质如PEG4000,PEG20000,PVP等,尽量从中选择一种添加使用.
蛋白储存常用的甘油、蔗糖、海藻糖、各类低聚糖等,对产品的储存稳定性有帮助,忽略这部分物质的添加可能产品从实验室走生产和市场.这类物质也是冻干细胞常用的.
这类物质的功能就更复杂.首先还是目的蛋白的活性,也维持胶体金的胶体稳定,它们是消除非性的封闭物质,也起着有分散胶体金颗粒的骨架作用.常用有BSA 、OVA、Casein,其他廉价蛋白似乎不太好找,脱脂奶粉个人不用,质量太难控制了,当然如果大家已经在用而且效果不错,也没有必要过于担心.
这个东西在这个产业里可是万万不能缺少,但是吸附材料已经用表面活性预处理的,也可以不拘泥于添加在免疫胶体金稀释液里.一般情况下,Tween20就可以了,其实蛋白质复性常用的非离子型表面活性剂都可以一试,前一段时间某位高人说tritonX-100等可能会干扰蛋白的N末端不要用,我听了不是很理解,在这里请高人指点.
产品种类千差万别,以上5类物质外,传说还有一些可以"提高产品性",“提高产品检测线性范围”、“强制转换毒品检测最佳cut-off范围”、“HAMA效应”、”线条时间深度变化终止“等等的神秘添加物,从理论上不排除存在的可能,但是往往一种”神物“有效的范围十分狭窄,也就是说一种”神物“可能只适用于一个公司一种抗体的一个产品,换个就无效了.寻找神物的工作往往是研发型的大公司的资深技术人员,而对神物的控制往往也是如同企业一级机密.
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