9) 对纯化浓缩后的Fab片段蛋白10~20μg进行SDSPAGE电泳,用12.5%聚丙酰胺凝胶,常规SDSPAGE电泳条件。对于鼠Fab片段抗体,由于轻链和重链量类似,故在25kD左右获一条带。对于人Fab片段抗体,如果λ链和Fd链的组合,可能获两条链,25kD左右的为Fd链,28kD左右的为λ链。
对于所获的Fab片段抗体,对某种性抗原的性鉴定,根据其所针对的抗原不同,则采用的方法也不同。主要方法有:
1) Fab片段抗体对同位素S35标记抗原的性放射免疫沉淀,适用于构象依赖或非构象依赖的抗原。在此试验中,所用Sepharose 4B珠子需偶联相应的抗人或抗鼠Fab抗体,除了性的蛋白带外,结果通常还会出现一条70kD左右的非性条带。
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