摘要：本实验介绍了兔红细胞玫瑰花环试验操作流程。玫瑰花环试验，又称为花结试验。是测定淋巴细胞数量和功能的一种方法。
4 吸收灭活小牛血清小牛血清56℃ 30min灭活后，取2体积的小牛血清，加1体积压积的家兔红细胞，混匀，置37℃水浴30min，离心沉淀，吸取上清液，4℃冰箱保存。
Ⅱ液姬姆萨氏粉05g，纯甘油33ml，甲醇33ml，先将姬姆萨氏粉溶于甘油中，并置60℃温箱中(或水浴中保温15～2h)，最后加甲醇即可。
1 1%家兔红细胞悬液的制备取家兔脱纤血或阿氏液保存的血液，以Hanks液洗三次，2000 r/min离心10min后，将压积红细胞用Hanks液配成1%悬液，含红细胞数约为1×108/ml。
2 豚鼠淋巴细胞的分离取肝素抗凝血10ml，加等量Hanks液稀释后，用毛细吸管沿管壁缓缓加入装有淋巴细胞分层液的试管内，使血液重叠于分层液上，用水平离心机以2，000 r/min离心30min。此时红细胞沉降至最下层，上层为血浆，中层为分层液，血浆与分层液的界面有一白色狭带为淋巴细胞和单个核细胞层(图3161)。用毛细吸管吸取界面处的淋巴细胞与单个核细胞，置于离心管中，用Hanks液洗涤，1 000 r/min离心10min，反复1次，最后用Hanks液配成1×107个细胞/ml浓度的细胞悬液。必要时可用台盼蓝试验进行存活率检查，应在95%以上(活细胞不着色)。
3 玫瑰花环形成试验取上述淋巴细胞悬液03ml，加入1%家兔RBC 03ml及灭活小牛血清01ml，混匀，37℃水浴保温25min，取出以500 r/min离心5min，弃上清，留少许液体，即可用此细胞液涂片或滴片进行观察，此时见到的玫瑰花环即为活性玫瑰花(Ea)。
如将此细胞液置4℃冰箱中作用2h(或过夜)取出后，再加入08%戊二醛2滴，轻轻旋转试管，使沉淀的细胞重新悬浮，用毛细管轻轻混匀。此时观察到的玫瑰花环为总玫瑰花(Et)。
(1) 湿片：取上述细胞液一滴加于事先铺有瑞氏染液的玻片上，覆以盖玻片，在高倍镜下观察，凡吸附4个或更多家兔红细胞的单核细胞，为RE花环形成细胞，共计数200个细胞，算出百分率。
(2) 干片：取培养物1滴于载玻片上，涂片、干燥，滴加甲醇固定5min，用pH值64 PBS冲洗，加Ⅰ液染4min，冲洗，再加Ⅱ液染4min，冲洗，待干，镜检。红细胞染成红色，淋巴细胞染成蓝色。可见淋巴细胞周围吸附有不同数量的红细胞，呈玫瑰花环状。
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