摘要：放射免疫分析的原理就是利用放射性核素标记抗原或抗体,然后与被测的抗体或抗原结合,形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的.
放射免疫分析的原理:就是利用放射性核素标记抗原或抗体,然后与被测的抗体或抗原结合,形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的.它又分为两种方法.
主要特点:标记的是抗原.其原理:未知抗原Ag+标记抗原Ag +已知定量抗体Ab标记抗原与抗体复合物AgAb+未知抗原与抗体复合物Ag Ab+游离标记抗原Ag (去除)(未知抗原多,标记抗原与定量抗体结合的复合物就少,表现为负相关).
临床上甲胎蛋白(AFP),癌胚抗原(CEA),8 一微球蛋白(pz—MG ),铁蛋白(Fer),人绒毛膜促性腺激素p亚单位(HCG-13)等的检测都是竞争性RIA法原理.竞争性RIA法,根据加样顺序与温育次数的区别,反应方式分三种:平衡法,将非标记抗原(被测物与标准品)、抗体、标记抗原依次加入反应管,混匀后一次性温育至反应达到动态平衡,再加分离剂分离B(复合物)与F(游离物)如:AFP,8 一MG,Fer;顺序加样法,先将非标记抗原(被测物与标准品),与抗体在反应管内作第一次温育,待反应达到动态平衡后.加入标记抗原,再作第二次温育后,分离B与F如:CEA;急诊检测法:为临床急需检测结果而提出的反应方式,不等RIA 反应达到动态平衡就终止反应;分离剂的选择有,PEG(聚乙二醇),第二抗体等.
PEG原理:PEG浓度达到7 一9 时能使抗原一抗体复合物沉淀.优点:经济,简便,通用.缺点:重复性差,非性结合率高.
第二抗体:第一抗体是可与被测抗原进行结合的抗体,来自家兔或豚鼠.用第一抗体为抗原,作用到羊,马身上,产生的抗第一抗体的抗体称第二抗体.第二抗体与第一抗体在适当条件下发生性结合,生成量很大的免疫复合物(AgAb ×Ab ),能自然沉淀.
从加样测定顺序上看,有三种方法:固相抗体先与未知抗原结合,再与标记抗体结合(正向两步法).然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数;未知抗原先与标记抗体结合,再与同相抗体结合(反向两步法).然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数;未知抗原与固相抗体和标记抗体同时反应(一步法,又称同时加样法).然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数.
糖类抗原CA50,CA125就用的是其中的第三种方法(一步法),血清中的未知抗原与固相抗体和标记抗体同时反应,生成夹心状的抗体一抗原一抗体复合物,然后去除游离的标记抗体,测固相抗体一抗原一标记抗体复合物的放射性计数.
pH和离子强度;反应温度,温度一般为37℃,也有45℃,室温,4℃ 冰箱;反应时间,操作中的注意事项:戴手套、防护镜等,将试剂盒从冰箱中取出,室温下放置30 min方可使用.
(2)加样要准确,移液器的使用(两个档位,一档吸人,二档排出)吸头(一个标本一个吸头,避免互相污染).加试剂:先看瓶签,再摇匀,最后吸人.(标记物一般为红色,一抗为兰色).
(4)分离剂加入:混匀静置时间,可以延长,不能缩短.抗原抗体复合物与第二抗体的充分结合.
(6)离心时间:也应按说明书中所要求来操作,转速一般为3 500r/min.往离心机里放反应管时,尽量让它直立(因为倾斜可能会使液体流出).吸上清液时,沉淀物在试管底部,真空泵的吸头头部不能直接插人到试管底部中央(会吸走沉淀物,而我们的目的是分离保留沉淀物),应该使吸头贴着试管管壁往下放,并且试管要稍微倾斜,但要在即将插到沉淀物边缘时停止,快速上升取出.少留一点点上清液也可.主要是沉淀物完整.
(8)报结果:碰到异常结果,要再次看一看沉淀物是否都在,患者情况如何,结果是否与患者情况相符,方可报出.非竞争性RIA法中,清洗固相包被珠时,清洗次数要严格按说明书中所要求来操作,不得减少.虽然RIA法的影响因素很多,但操作中只要注意上述事项,RIA法的稳定性还是相当不错的.主要是它存在放射污染,这个问题不易解决,影响了它以后的发展,如今电化学发光免疫分析,化学发光免疫分析,酶联免疫分析,磁酶免疫分析等相继推出,发展很快. RIA法将被淘汰.
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