石蜡包埋组织流式细胞仪DNA含量分析是石蜡包埋组织切片与流式细胞术(flow cytometry,FCM)结合使用来测量DNA含量及倍体分析,这一结合是流式细胞仪在临床应用中,特别是在肿瘤研究方面开拓了新的研究途径.FCM是激光、电子和电子计算机、流体喷射技术的综合发展应用,是快速定量分析细胞的技术,要求被检细胞呈悬浮状态.目前已可测量细胞的大小、体积、DNA含量、DNA合成速率、RNA含量、表面抗原、染色体等.由于制备样品技术的原因,过去许多流式分析资料仅限于采用新鲜组织标本,Hedley等1983年首先报导了FCM分析石蜡包埋组织切片制备分散细胞悬液技术来进行DNA含量的检测,从组织切片中能获得足够数量的单个细胞,且与新鲜组织分离获得的单个细胞在形态及DNA含量组方图上均极为相似.目前国内也在逐步开展这方面的研究.由于这种方法取材可在病理组织观察或诊断基础上进行,比活检或手术切除标本更为准确,又可做回顾性研究分析;且对DNA检测速度快、数据客观可靠,在肿瘤诊断、预后的预测和治疗反应上具有重要价值;利用过去的标本可成批制作细胞悬液、成批上机测试,避免了仪器调试状态不同带来的影响,石蜡包埋块保存时间的长短对结果影响不大.
常规固定(多数用福尔马林)、石蜡包埋的组织块均可用于流式细胞术,但含苦味酸或汞的固定液均不宜使用.切片厚度以30～50微米为宜.切片脱蜡要干净、彻底,否则制备出的细胞悬液中碎片多,影响测定.梯度酒精水化后用胃蛋白酶或胰蛋白酶消化,消化后镜检呈单个分散状态;由于福尔马林固定可使DNA 和核蛋白产生共价交联,影响DNA和染料的化学定量结合,导致荧光强度下降,蛋白酶可其联结,改善测定的组方图质量,消化时间以能分散细胞及细胞碎片尽量少为适度,以100目尼龙筛网滤去未消化完的组织片,离心去上清液后,加入冰冷的70%酒精固定,放入4℃冰箱备用.上机前染色.
最新评论