免疫组化：B淋巴细胞膜表面免疫的检查

　　摘要：本实验介绍了用直接免疫荧光法检查B 淋巴细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)的基本原理和操作步骤。

　　SmIg 是B 细胞的抗原识别受体，也是B 细胞的表面标志，用直接免疫荧光法可检查出SmIg。用荧光素标记的抗Ig抗体，在一定条件下与淋巴细胞混合，荧光素标记的抗Ig 抗体可以与B 细胞表面的Ig 结合，在荧光显微镜下观察可见B细胞膜上出现荧光。此方法可用来鉴定B 淋巴细胞。

　　1. 采用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖取出脾脏放入盛有6ml Hanks液的平皿中，用100 目钢网研磨，混匀。从中吸取1ml细胞悬液放入一试管中，加满Hanks液，离心1000rpm，10 分钟，洗涤细胞一遍。倾去上清，沉积的细胞恢复1ml容积，即为约1×107/ml的细胞悬液。另取一支试管，吸取1×107/ml的细胞悬液0.4ml加Hanks液3.6ml，即为1×106/ml的细胞悬液。

　　2. 取2ml离心管两只，各加入1×106/ml的细胞悬液1ml，用台式离心机离心2000rpm，3 分钟，弃去上清液。一支加入荧光素标记的兔抗鼠Ig抗体100μl，另一支不加抗体作对照，置4℃冰箱30 分钟。

　　3. 取出离心管，用Hanks 液洗涤细胞两次，以去除游离的抗体，最后一次离心后弃去上清液，留少许回流液，混匀，滴片，用荧光显微镜观察。

　　荧光显微镜观察，落射激发光下SmIg 阳性细胞可见环状或斑点状荧光。用钨丝灯光源透射光照明计数同一视野内淋巴细胞总数，共计数200～300 个淋巴细胞，算出其中SmIg 阳性细胞的百分数。