什么是bisulfite sequencing PCR, BSP？

　　DNA经亚硫酸氢盐硫化处理后,DNA双链中的“C”为“U”,通过随后的PCR,将“U”为“T”,但亚硫酸氢盐不能使已发生了甲基化的DNA的“C”发生上述,因此,根据经亚硫酸氢盐处理的DNA模板设计引物时,先输入感兴趣的DNA序列,程序将会显示2种序列:一种是输入的源DNA序列;另一种是硫化处理后的DNA序列,除了CpG岛上的5甲基胞嘧啶(5mC)之外,所有非甲基化的“C”都转换成了“T”,根据后的序列设计引物,进行BSP和MSP。

　　1.MSP：DNA经亚硫酸氢钠处理后，所有未甲基化的胞嘧啶发生脱氨基变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶无此改变。DNA的甲基化差异转变为序列差异，设计两对分别针对甲基化与非甲基化等位基因的引物，结合PCR扩增就可以将甲基化与非甲基化等位基因区分开。这种方法灵敏度高，对DNA的质和量需要少。

　　2.BSP：甲基化的胞嘧啶在亚硫酸氢钠发生脱氨基后不会转变，用一对性引物扩增后测序，再与DNA原始序列比对确定甲基化位点。测序法克服了只能针对单个位点检测，并且这些位点必须是性内切酶识别位点的缺点，可以对任何基因序列的甲基化状态进行检测。