②将细胞团块移至6 cm或10 cm培育皿中，改用含10%FBS的培育液培育(每个6 cm培育皿加5 ml培育液);
③将培育皿放入37℃CO2培育箱培育，每天取出1-2次，悄悄晃悠或用粗口滴管吹打，使细胞悬浮，各团分隔，并每日察看;
④一般培育第3天细胞团起头分层，外部是一层较大的内胚层样细胞，内部的细胞则小而慎密，为外胚层样细胞和干细胞，此为简单类胚;再培育5-10天，分层增加，并呈现空腔，整个胚呈圆泡状，此为囊状胚。
⑤收集囊状胚，提取mRNA，反为cDNA，然后利用三胚层的引物进行PCR来检测三胚层的基因的表达环境，从而确定囊状胚中能否有三胚层的分化，如许能够确定细胞能否具有正在体外分化为三胚层细胞的能力。
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