T淋巴细胞表面具有植物血凝素(PHA)和刀豆蛋白(ConA)等非性有丝原受体,在体内或体外遇到有丝原刺激后,可为淋巴母细胞,依其细胞程度可测定T细胞的应答功能,称为淋巴细胞试验.
T淋巴细胞表面具有植物血凝素(PHA)和刀豆蛋白(ConA)等非性有丝原受体,在体内或体外遇到有丝原刺激后,可为淋巴母细胞,依其细胞程度可测定T细胞的应答功能,称为淋巴细胞试验.
(1)形态学改变:细胞体积明显增大,为成熟淋巴细胞3-4倍.核膜清晰,核染色质疏松呈网状.核内见明显核仁1-4个.胞浆丰富,嗜碱性,有伪足样突出.胞浆内有时可见小空泡.
利用淋巴母细胞的不同特点,目前有多种实验方法可用于淋巴细胞程度的检测.根据其形态学改变,可通过体内法和体外法检测;根据细胞内核酸和蛋白质合成增加的特点,可通过 3 H-TdR 掺入法检测;根据细胞代谢功能旺盛的特点,可通过MTT法进行检测.
在体内,当外周血T淋巴细胞遇到PHA 或ConA后可发生形成淋巴母细胞,通过采集外周血涂片染色,镜下计数100-200个淋巴细胞,计算其率.率高低可反映机体细胞免疫水平, 因此常作为检测细胞免疫功能的指标之一.形态学方法简便易行,但结果受操作和主观因素影响较大.
5.染色:加姬姆萨或瑞氏染液2滴于涂片上,同时加2滴水,用吸管水平涂开,使染液均匀覆盖涂抹面,染色时间为5-10分钟.
过程中,常见的细胞类型有：淋巴母细胞、过度型淋巴母细胞、核相细胞和成熟淋巴细胞等.计数时,过度型淋巴母细胞和核相细胞亦作为细胞.
T淋巴细胞受 ConA或PHA激活后,进入细胞周期有丝.当进入细胞周期S期时,细胞合成DNA量明显增加,在培养基中加入氚(3H)标记的DNA前身物质胸腺嘧啶核苷(TdR),则3H-TdR 被作为合成DNA的原料被摄入细胞,掺入到新合成的DNA中.根据同位素掺入细胞的量可推测淋巴细胞对刺激物的应答水平.掺入的同位素3H,经液体闪烁测量法测出,将3H每分脉冲数(cpm)加以计算,用不同公式表示结果.
MTT法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)是Mosmann1983年报告的.原理是活细胞内线粒体脱氢酶能将四氮唑化物(MTT)由还原为兰色的甲肷,后者溶于有机溶剂(如二甲基亚枫、酸化异丙醇等),甲肷产量与细胞活性成正比.可在560nm处用酶标仪测定其OD值.
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