细胞培养：G418筛选慢病毒感染稳定细胞株

　　用慢病毒筛选稳定细胞株,以G418筛选方法为例,筛选出稳定整合Neomycin抗性基因的细胞系.

　　每种细胞对抗生素的性不同,因此,准备建立稳定细胞系之前,需要确定能够在10-14天细胞的最佳浓度.

　　2、接种后第二天在100ug/mL~1mg/mL的G418浓度范围内进行筛选.3、每隔3天跟换1次培养液,保持G418浓度不变.

　　4、选择出在10~14天内使细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验.由于每种细胞对G418的性不同,一般变动在100ug/ml～1000ug/ml范围.

　　2、准备 3ml 培养基,加入Polybrene,终浓度为6-8 μg/ ml.将制备好的适量病毒颗粒加至上述培养基,轻吹混匀.去除旧的培养基,加入含病毒培养基.

　　4、换用含最优浓度G418 的培养基.根据细胞性不同,以后每隔3-5天换用新鲜的含有G418的培养基,以替换含大量死细胞的培养基.待抗性细胞长满以后,细胞转入10cm 培养皿,同时,留一部分细胞在原来的60mm 平皿内,待细胞长满后,收获细胞,在蛋白或mRNA 水平鉴定基因过表达或敲低效率.