冷冻液：一般是以 9 份小牛血清或细胞培养液与 1 份 DMSO 混合而成。现配现用，或配制后放入普通冰箱冰盒内冷冻保存。使用前，于室温下水浴溶解。
普通冰箱、-30℃低温冰箱和-70℃～-80℃超低温冰箱、液氮冻存罐、高速离心机、电子计算机程控降温仪等;
3) 向细胞沉淀物中加入冷冻液，轻轻吹打混匀，使细胞密度达 1×106～1×107个/ml;
做好冻存记录。记录内容包括冻存日期、细胞代号、冻存管数、冻存过程中降温的情况、冻存以及操作人员。
1. 在使用 DMSO 前，不要对其进行高压灭菌，因其本身就有灭菌作用。高压灭菌反而会其结构，以致降低冷冻效果。在常温下，DMSO 对人体有毒，故在配制时最好带手套。
2. 在将细胞冻存管投入液氮时，动作要小心、轻巧，以免液氮从液氮罐内溅出。若液氮溅出，可能对皮肤造成冻伤。操作过程中最好带防冻手套、面罩、工作衣或防冻鞋。
3. 应注意控制冻存细胞的质量。既要在冻存前保障细胞具有高活力，还要确保无微生物污染，这样的细胞才具有冻存价值。另外，在每批细胞冻存一段时间后，要复苏 1～2 管，以观察其活力以及是否受到微生物的污染。
4. 冻存管宜采用塑料冻存管，不宜使用玻璃安瓿。因为在复苏时，需要从-196℃的液氮中取出冻存管，立即投入 37～40℃温水中，温差很大，玻璃安瓿瓶容易爆炸而发生。
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