细胞培养:动物细胞融合

  细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的过程。在自然情况下,体内和体外培养的细胞均能发生自发融合现象。人工方法细胞融合开始于50 年,现在这项技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫,肿瘤及细胞工程的重要手段。在物(如仙台病毒,聚乙二醇)作用下,相互融合的细胞发生凝集,随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化,主要是某些化学键的断裂与重排,最后打通两质膜,形成双核或多核细胞(此时称同核体或异核体)。通过有丝,细胞核便发生融合,形成杂种细胞。

  2. 试剂 50%聚乙二醇(PEG):称取一定量的PEG(MW=4000)放入刻度试管,在酒精灯火或沸水中加热溶化。待冷至50℃时,加入等体积并预热至50℃的GKN 液混匀。

  1. 用注射器取2ml Alsver 液,再从翼下静脉取鸡血2ml,注入试管内,再加6ml Alsver 液,混匀后置4℃冰箱中可备作3—4 天用。

  4. 在沉降血球中加入1mlGKN 液,混匀使之成为细胞悬液。(可加GKN 液调节稀释使每立方毫米含红细胞3~4 万个)。

  5. 在“4”液中加入6—8 滴(约0.5ml)50%的PEG 液,迅速混匀,常温下2~3min 滴片镜检。观察时注意不同程度的融合现象。通常分为五个阶段。①两细胞膜接触,粘连;②细胞膜形成穿孔;③两细胞的细胞质连通;④通道扩大,两细胞连成一体;⑤细胞完全合并,形成一个含有两个或多个核的圆形细胞。

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