细胞培养：细胞原代培养

　　将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以、生长和繁殖,这一过程称原代培养.

　　仪器：培养箱(调整至37℃),培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃)

　　1、器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎,置75%酒精泡2—3秒钟(时间不能过长、以免酒精从口和浸入体内)再用碘酒消毒腹部,取胎鼠带入超净台内(或将新生小鼠在超净台内)解剖取肝脏,置平皿中.

　　3、用手术剪将肝脏剪成小块(1mm2),再用Hank’s液洗三次,转移至小青霉素瓶中.

　　4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液,37℃中消化20—40分钟,每隔5分钟振荡一次,或用吸管吹打一次,使细胞分离.

　　上述消化分离的方法是最基本的方法,在该方法的基础上,可进一步分离不同细胞.细胞分离的方法各实验室不同,所采用的消化酶也不相同(如胶原酶,透明质酶等).

　　自上方法第3步后,将组织块转移到培养瓶,贴附与瓶底面.翻转瓶底朝上,将培养液加至瓶中,培养液勿接触组织块.入37℃静置3—5小时,轻轻翻转培养瓶,使组织浸入培养液中(勿使组织漂起),37℃继续培养.

　　2、点燃酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼,金属器械烧灼时间不能太长,以免退火,并冷却后才能夹取组织,吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜.