1、待细胞生长达一定数量后,倒出旧培养液,用胰酶消化后,Hanks冲洗2次,加入不含血清的培养液,吹打制成细胞悬液.
2、取编号为A、B、C三个培养瓶.首先把悬液接种入A培养瓶中,置温箱中静止培养5～20分钟后,轻轻倾斜培养瓶,让液体集中瓶角后慢慢吸出全部培养液,再接种入B培养瓶中后,向A瓶中补充少许完全培养液置温箱中继续培养.
3、培养B瓶中细胞5～20分钟后,按处理A的方法,把培养液注入C培养瓶中,再向B瓶补加完全培养基.
1、先是用0.5%胰蛋白酶和0.02%EDTA(1：1)混合液漂洗培养基细胞一次,然后再换成新的混合继续消化,并在倒置显微镜下窥视和不时摇动培养瓶,到半数细胞脱落下来后,便立即停止消化.
2、把消化液吸入离心管中,离心去上清,吸入另瓶中,加培养液置温箱中培养,向原瓶内也补加新的培养液继续培养.用此法处理后,成纤维细胞比肿瘤细胞易先脱落,经过几次反复处理,可能把成纤维细胞除净.
1、可用0.5mg/ml的胶原酶消化处理,边消化边在倒置显微镜下窥视,当发现成纤维细胞被除掉后,即终止消化.
2、用Hanks洗涤处理一次后,更换新培养液,继续培养,可获肿瘤细胞.如成纤维细胞未被除净,可再次重复.
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